Oligo HiGene 寡聚核苷酸转染专用  C1509

 0.25ml in water (for 500 in vitro transfections in 24-well plates)

常温运输，4 oC 1年稳定，－20 oC长期保存。

 

 

描述：Oligo HiGene是经过特殊交联修饰的新一代阳离子聚合物，其高密度阳离子基团与带负电的核酸结合形成致密的纳米复合物，通过内吞入胞。在细胞内Oligo HiGene有效缓冲内吞小体的pH，保护核酸免受降解，并高效介导基因转运到胞浆胞核表达。Oligo HiGene有血清转染效率更高，并允许细胞在铺板时或铺板后立即转染，其卓越的in vitro和in vivo转染能力堪比jetPEI、Lipofectamine 2000、ExGen 500、FuGENE、Polyfect、SuperFect等转染试剂。Oligo HiGene是广谱转染试剂，可转染的细胞包括A497,A549, BHK, Caco-2, C-26, C 2C 12, C3H/10T, CHO, COS1, COS7, Sf9, HeLa, HEK293, HT-29, MCF7, NIH3T3, Jurkat, K562, RAW264.7, THP1, U937, PC12, L929, SHY-5Y, Vero,原代神经元、原代肝细胞、皮肤成纤维细胞、人牛血管内皮细胞、单核/巨噬细胞、人胚胎干细胞等。Oligo HiGene高效转染siRNA或寡聚核苷酸，并有优异的整体动物转染能力，介导基因在心肺肾肝脾等各种组织高效表达。

 

特征：

2  有血清转染，转染前后可不更换培养基

2  细胞铺板时立即转染，节省时间

2  媲美Lipofectamine 2000, jetPEI, FuGENE

2  高效转染siRNA、DNA、寡聚核苷酸

2  in vitro转染细胞谱广，包括各种原代细胞和神经元

2  in vivo动物转染，心肺肾肝脾等高效表达

 

自备试剂：无菌 150mM NaCl即0.9%生理盐水或无菌蒸馏水或PBS缓冲液，用于离体细胞转染制备转染混合物。5%无菌葡萄糖，用于离体或在体转染转染混合物制备。与复合物颗粒形成有关，勿用其它缓冲液替代。

 

DNA、siRNA和寡聚核苷酸：建议溶于灭菌蒸馏水。质粒DNA高纯度OD260/280 ~1.8，无内毒素。可用内毒素清除剂(#D1501)清除内毒素。寡聚核苷酸和用于RNA干扰(siRNA)的核苷酸，可单独或与质粒DNA共转染，但必须使用经HPLC或凝胶洗脱纯化去除杂链的高纯度片段。siRNA和寡聚核苷酸与DNA转染及优化操作相似，但对其用量进行细致的优化很重要。

 

细胞准备（重要!）

接种细胞数：参见附表细胞计数接种。培养时间：转染前应培养~24h，使之处于分裂和旺盛生长期。细胞密度与转染时机：培养~24h后，细胞覆盖培养皿表面积的70~90%时为转染最佳时机。低密度细胞的转染率并不低，但总细胞数少因而蛋白表达总量也不会很高。在较高细胞密度时转染较好，但100%长满的细胞转染效率很低，因此接种细胞要均匀，以减少因局部紧密接触而致生长抑制的难转染细胞，否则最好重头接种细胞。Oligo HiGene允许在细胞铺板时或铺板后立即转染，效果与贴壁后转染相似，但大大节省时间和劳动，适合高通量筛选。甚至一些难转染细胞也可尝试此即时转染方法。血清和培养基：Oligo HiGene具有卓越的转染能力，血清和抗生素不影响转染，在10~30%血清培养基转染表达效率更高。转染混合物体积为培养基的1/10，参见表第5栏。如果培养基未明显变黄，转染前可不更换。如转染结果满意，转染后无需更换培养基。但转染混合物稀释了培养基，转染4~8小时后换培养基会可进一步增加转染效率。