ATP Assay Kit(Bioluminescence)

产品简介

ATP检测试剂盒（ATPAssay Kit）是一种特异灵敏的检测三磷酸腺苷（ATP）的试剂盒。生物机体内能量物质最终主要代谢为ATP，用于生物活动的能量消耗。通过定量检测ATP可以判断微生物污染、细胞增殖、细胞损伤或细胞活化情况。

本试剂盒采用生物发光法检测ATP浓度，检测原理为萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）催化ATP和Luciferin反应释放光子，在Luciferin和Luciferase过量的反应体系中，发光强度与ATP浓度成正比，通过检测发光强度即可检测ATP的浓度。

本试剂盒经过特殊优化，具有良好的检测线性，比一般的试剂盒测定准确度高，另外通过减缓发光信号衰减带来较高的时间稳定性，发光信号可以在反应启动后5-30min内测定。

本试剂盒检测ATP线性范围为0.001-1μM，灵敏度≤0.001μM。

本试剂盒能够检测细胞裂解上清、组织裂解上清、细胞培养上清、血浆、血清及环保样品中的ATP。

试剂盒组成

储存条件

-20 ℃储存，有效期12个月。

注意事项

1.每次测定时利用标准品制作标准曲线。

2.实验过程中，除检测缓冲液外，其它试剂请置于冰上。

3. 本产品仅限专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

测定前准备

1. 样品的准备

1.1细胞裂解上清的准备：将需要测定的细胞(1×10⁶-1×10⁷)收集到2ml的离心管中，4℃、300g离心5分钟，弃去上清，然后加入200μl含0.1%Triton X-100的PBS，冰浴裂解30min，4℃、10000g离心10分钟，收集上清。注：利用不含0.1%Triton X-100的PBS，通过超声裂解亦可。

1.2组织裂解上清的准备：将需要测定的组织(20-50mg)收集到玻璃匀浆器或自动匀浆管中，然后加入0.5ml含0.1%Triton X-100的PBS，匀浆1min，4℃、10000g离心10分钟，收集上清。注：利用不含0.1%Triton X-100的PBS，通过超声裂解亦可。

1.3细胞培养上清的准备：将需要测定的细胞接种到培养板中，经过干预因素处理后，直接吸取细胞上清，如果是悬浮细胞，4℃、300g离心5分钟，收集上清。

1.4血浆样品的准备：取新鲜抗凝血液，4℃、1000g离心10分钟，上清为血浆。

1.5血清样品的准备：取新鲜血液，室温凝固30min，4℃、1000g离心10分钟，上清为血清。

2. 试剂盒的准备

ATP检测工作液的配制：根据待测样品数参考下表配制适当量的ATP检测工作液，表中试剂按比例混

合后即为ATP检测工作液。

3. 标准品的准备

在1.5ml离心管中，加入990μl纯水或裂解液，再取10μl的100μM浓度ATP标准品加入离心管中配制1μM浓度ATP标准品；然后取另外8根1.5ml离心管，分别加入500μl纯水或裂解液，再吸取500μl的1μM浓度ATP标准品依次倍倍稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0312、0.0156、0.0078、0.0039μM浓度。

测定方法

1.参考下表，使用白色96孔板，先加入标准品或样品，然后加入ATP检测工作液，混匀，室温孵育5分钟。

2. 待反应完成后，利用化学发光酶标仪测定相对发光强度（RLU）。

数据处理

利用标准品浓度为横坐标，RLU值为纵坐标制作标准曲线，并获得横纵坐标之间的函数关系式，然后利用标准曲线和各样品的RLU值计算样品中ATP浓度。ATP标曲测定如下图所示：

参考文献

1.O. Konopatskaya, S.A. Matthews, M.T. Harper, Karen G, J.M. Cosemans, C.M. Williams, et al., 2011. Protein kinase C mediates platelet secretion and thrombus formation through protein kinase D2. Blood. 118: 416-424.