普利莱 组织冰冻切片OCT包埋剂 货号: C1400

货号	产品名称	规格	价格
C1400	组织冰冻切片包埋剂 （Tissue OCT-Freeze Medium ）	100ml	160元

描述：冷室、组织块、包埋剂、切片刀之间的温度平衡于优化的切片温度(optimum cutting temperature, OCT)附近，是获得高质量冰冻切片的保证。不同的组织因构成各异而具有不同的OCT温度。当冰冻组织在接触刀刃的瞬间，局部温度短暂升高发生局部融化；随后切开的组织薄片暴露于冷室被再次骤冷冰冻。这种融化-冰冻温度变化是切片皱褶或断裂的内在原因，在此基础上切片的软硬度和厚薄度进一步影响皱褶产生(1)。在切片过程中，冰冻包埋剂也须历经与组织类似的温度变化，这就要求包埋剂必须具有与组织块相近的冰冻速度和软硬韧度。

我公司提供的Tissue OCT-Freeze Medium是由高分子聚合物组成的无色透明粘稠液体，骤冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近，因而能保证优化的OCT温度，并具有支持填充、减少皱褶和断裂等作用。可任意添加于切片机的样品架以支持和固定样品。

与广为使用的Tissue-Tek OCT Compound包埋剂相比，普利莱的包埋剂的突出优点是：支持超薄和超厚(2~100 μm)冰冻切片并减少皱褶和断裂。不影响后续免疫组化、原位杂交、病理染色等操作，并可经由水或PBS冲洗完全去除，是理想的组织冰冻包埋剂。

适用：组织和培养细胞的冰冻包埋固定。用于临床快速病理染色诊断、免疫组化、原位杂交。

组成：120 ml，4oC 1年。可常温放置。常温和4oC为无色透明粘稠液体，温度降低时逐渐变粘稠并固化。

使用前标本准备：

冰冻切片标本可采用 (1) 新鲜组织，特点是快速，但未用完的包埋组织块不能保存；(2) 使用经典方法10%甲醛或4%多聚甲醛室温2~10分钟固定过的组织，优点是既不影响后续步骤，包埋组织块又可长期冰冻保存，随时再用，缺点是步骤稍繁。(3) 培养细胞，800g离心10分钟收集培养细胞，用吸头或针头拨出细胞沉淀块，放入OCT包埋剂内。

应避免采用降低组织冰点的甲醇乙醇固定。本产品说明书不提供关于组织取材、渗透、固定、冰冻切片等技术信息。用户应阅读冰冻切片机操作手册，参考各种常规技术方法。

使用方法：

1. OCT包埋：用水或PBS冲洗固定的组织块，用吸水纸吸去液体。在盛标本的包埋模子内，挤出适量的包埋剂，放入组织和细胞沉淀块，加包埋剂完全埋没组织块。可用2层铝箔纸折叠成简易的模子。如有气泡可用针头或吸头吸出。

2. 冰冻：将盛有组织细胞和包埋剂的模子，正置于切片机冷室内冰冻10分钟。此时，包埋剂为乳白色固体。包埋剂和组织冷冻时体积略有膨胀，因此模子应正置，由底部向顶部进行冰冻。也可将OCT包埋的组织置于干冰或液氮，或放入－40~－70 oC冰箱冰冻固化保存，用前取出置于切片机冷室内平衡温度(否则损坏刀)。

3．切片：可在切片机的组织卡盘(chuck)上加少许包埋剂并在其固化前嵌入组织块，然后再于组织周围加入少许包埋剂使其稳定。进行常规切片，厚度范围2~100 μm。

4. 收片后，用适量水或PBS冲洗切片3次，每次2?3分钟，洗除包埋剂。而后可进行常规组化染色、病理染色、原位杂交。未用完的组织块可冷冻储存。

附表为新鲜组织的冰冻切片OCT温度。固定过的组织的OCT温度升高相应5~10°C

组织	°C	组织	°C	组织	°C
子宫刮出物	-7	肾	?15	子宫颈	?20
脑	?10	肺	?16	卵巢	?20
肝	?10	肌肉	?16	前列腺	?20
脾	?10	结蹄组织	?16	消化道	?20
睾丸	?10	皮肤	?16	骨髓	?20
甲状腺	?10	心	?18	连脂肪皮肤	?25
唇	?13	胰腺	?20	乳腺	?30
淋巴结	?15	子宫	?20	网膜脂肪	?35

通常折中采用?20°C。肝脑脾等组织的OCT切片温度应在?10 oC，否则易碎。脂肪或含脂肪多的组织的OCT切片温度更低，否则易皱褶。

常见问题及解决方案：

易碎	冷冻过快，或标本太大
组织、包埋块从支架脱落	包埋剂不足，组织在包埋剂中的位置过偏
组织向前推进但不能顺利切片	刀和组织未固定紧，刀的角度不合适，组织未完全冷冻
切片卷曲	Anti-roll plate不干净，切片太薄，刀钝
切片撕裂	组织过分冷冻，刀口受损、不洁
切片融化	冷室和刀的温度不正确
刀上有雾	切片机开盖时间过长
切片粘在 anti-roll plate	温度不正确，anti-roll plate不洁
切片歪向一侧	刀口钝、受损，anti-roll plate受损
切片从玻片脱落	没用玻片粘附剂，切的是固定组织、脂肪含量高的标本，操作粗糙
切片水平裂痕	切片时标本太冷

参考文献：

Pearse AGE.Histochemistry, theoretical and applied, vol. 1: preparative and optical technology. 4th Ed. Edinburgh, UK: Churchill Livingstone, 1980.