葡萄糖氧化酶法测定试剂盒(适用于组织、细胞等) E1011

货号	产品名称	规格	价格（元）
E1011	组织细胞葡萄糖氧化酶法测定试剂盒	105次	560

描述：葡萄糖能够为组织细胞提供能量。生理性饥饿、剧烈运动、营养不良状态都会导致血糖降低，糖尿病、肥胖等疾病会使血糖升高。采用氧化酶法进行葡萄糖含量测定，是世界卫生组织和中国《全国临床检验操作规程》推荐的临床血糖检测方法。本试剂盒对此法经过改良，使检测灵敏度比普通方法提高约10倍，其检测下限为5~10μmol/L，线性范围在10~20000μmol/L。适用于测定动物组织细胞内低浓度葡萄糖含量，也胜任各种临床和基础实验中对于葡萄糖含量的测量。

原理：根据Trinder反应原理1,2，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2)；然后用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢，使色原物质(4-氨基安替比 林)生成醌亚胺，颜色的深浅与葡萄糖浓度成正比。

适用范围：适用于动物实体组织、培养细胞中葡萄糖含量的测定。

组成(105次微量检测)：

(1)1ml葡萄糖标准品10 mmol/L (等于180 mg/100 ml)；

(2) 16 ml试剂R1；(3)4 ml试剂R2；(4)50 ml裂解液

以上组分4 oC保存6个月有效。

所需设备：721、722型可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。最佳工作波长550-555nm，如仪器无此波长建议优先选用570、530、490nm。

操作步骤：

一．组织细胞裂解：1、动物细胞：离心收集细胞后，通常情况下，可按比例每1x106个细胞加入0.05-0.1ml裂解液，震荡裂解后室温静置10分钟。2、实体组织：离心管精确称重，加入组织块后再称重，二者相减(即减量称重法)计算组织重量(约50mg)。建议按每1mg组织加入5-10μl裂解液，用玻璃匀浆器或者电动匀浆器匀浆破碎组织，匀浆后室温静置10分钟。

二．裂解液处理：取适量上清液转移到1.5ml离心管中，余下的裂解液可用BCA法蛋白定量试剂盒(P1511)进行蛋白定量或－20oC储存。

三．工作溶液配制：按4:1比例，取8 ml试剂R1与2 ml试剂R2混合得到10 ml工作溶液。当天使用或4oC保存1周。

四．标准品稀释：10 mM葡萄糖标准品用蒸馏水或与样本缓冲液一致的液体稀释为2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625μM。注意设置0浓度对照反应管。由于葡萄糖测定反应的线性关系甚好且范围很宽，通常设置黑体标记的4管即可，一般不需要设置大于2~10mM的标准管，以此得到的标准曲线用来测定大于2 mM葡萄糖浓度通常不会失真。世界卫生组织(WHO)推荐也可仅设置单一浓度的标准管。注意：不能使用用户自己简单配制的葡萄糖标准溶液。

五．葡萄糖含量测定：

1.参见下表加样。先加标准品或待测样品，后加工作溶液。可依据葡萄糖浓度高低微量调整样品与工作液体积比例。超出线性范围可适当稀释。

2.37oC反应20min (15~30min)或25oC室温反应30 min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60 min内稳定。

3.先用蒸馏水 工作液空白管调零，然后测定各管OD5值。

4.绘制标准曲线并计算葡萄糖浓度。

附Excel作图步骤：各标准管OD值为y轴，浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-和-R2值-。

5.如果仅用单一标准管：葡萄糖浓度(mmol/L) =标准品浓度×(样品管OD－空白管OD) / (标准管OD－空白管OD)。

6.以每mg蛋白浓度或细胞数校正葡萄糖含量。

96孔微板测试（反应体积200μl）				比色杯测试（反应体积800 μl）
	空白管	标准管	样品管		空白管	标准管	样品管
蒸馏水μl	5			蒸馏水μl	20
标准品μl		5		标准品μl		20
标品μl			5	标品μl			20
工作溶液μl	195	195	195	工作溶液μl	780	780	780