SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(SDS-PAGE Gel kit) B1027

描述：本产品提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制高质量的各种浓度的变性PAGE胶，方便，快捷。本试剂盒至少可以配制30块常规大小的PAGE胶，并且其中的分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS，使用时无需另外加入。

组成：

*试剂盒中提供的APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成10%APS（0.5 g APS加入5 ml双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。

操作步骤：根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围参考附表1。

1．灌制分离胶（试剂使用量参考附表2）

（1）参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

（2）将不同体积的30%Acr-Bis（29:1）、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯中混合。

（3）加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。

（4）将分离胶溶液灌入凝胶玻璃槽中，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，用于压平液面。

（5）静置30-60min，至分离胶凝固。

2．灌制浓缩胶（试剂使用量参考附表3）

（1）去除覆盖在分离胶上的水层，并用滤纸吸干，水份吸不干，可能会导致浓缩胶和分离胶分开。

（2）将不同体积的30%Acr-Bis（29:1）、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯中混合。

（3）加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。

（4）将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，插入样品梳，避免产生气泡，静置20-30min，直至浓缩胶聚合。

（5）待凝胶聚合后，小心拔下梳子，以免破坏加样孔。

（6）进行常规电泳。

注意事项：

1.10%APS配置好后，应当-20℃保存，并且应尽量减少室温存放时间，以防失效。

2.TEMED易挥发，使用后请拧紧瓶盖。

3.凝胶凝聚的速度与温度等关系密切，可通过调节APS和TEMED的用量，控制凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作。

4.丙烯酰胺，TEMED等有毒，操作时请穿实验服并戴手套。

5.在凝胶配制过程中，应尽量避免产生气泡。

6.在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不宜过快。