一氧化氮检测试剂盒 E1030

货号	产品名称	规格	价格（元）
E1030	一氧化氮NO检测试剂盒（NitricOxideAssayKit）	500次	410

描述：一氧化氮(Nitric oxide，NO)是一种重要的气体信号分子和效应分子，可以作为第二信使参与许多生物效应和生理病理过程。体内NO含量低，半衰期短，且易被氧化。Griess反应一直是最经典的生物样品NO测定方法，反应产物的光密度OD值与NO浓度呈线性关系。本试剂盒基于Griess反应原理，采用优化的反应条件和比色法测量液体样品NO的浓度。方法简单，线性范围2.5~800μM。按照每150 μl反应体系含50 μl样品推算，相当于样品的检测灵敏度约为300 pmol/50 μl。

参考文献：

1.Bredt, D.S. and Snyder, S.H. (1994) Nitric oxide: a physiologic molecule. Ann. Rev. Biochem. 63, 175

2.Griess, P. (1879) Chem. Ber. 12, 426.

适用：液体生物样品如血液、尿、培养基中NO的检测。

组成：(500次)

1.NaNO2标准品 0.5 ml (100 mmol/L)

2.Griess R1 25 ml

3.Griess R2 25 ml

储存：4oC避光保存6个月有效

所需设备：96孔酶标板，可见光分光光度计，最佳波长540nm，也可选用490-550 nm进行测定，但灵敏度略降。

准备步骤：

测定前取出试剂升温到室温。

标准品稀释：每次测量均新做标准曲线，用与样品相似的液体稀释标准品。

A.取100 mmol/L NaNO2标准品8μl，加到992μl蒸馏水中，得到1000μl之800 μM管。

B.从800 μM管取200μl加入200μl蒸馏水得400μM管，然后依次取样用蒸馏水倍比稀释，得到200、100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.57 μM管。最后设置不加标准品的0浓度管。

C.从以上各管各取50 μl加入酶标板。

D.等待后续加入样品，以及加入Griess试剂后，一起反应并测量。

样品测量：

1.取50 μl标准品或样品，加入96孔板中。

2.每孔加入50 μl Griess R1

3.优化步骤：室温避光放置5分钟。此步骤可进一步提高灵敏度。但NO浓度较高时可省略。

4.每孔加入50 μl Griess R2。

5.室温避光放置5分钟。

6.540 nm (490-550 nm均可)测定吸光度。应在30 min内测完，以免退色降低灵敏度。

7.制备标准曲线：以吸光度OD值为x轴，标准品浓度为y轴，用Excel做图并得到标准曲线公式。

8.将样品OD值代入公式计算NO浓度。

说明：

1.在30 min内测完，以免退色而降低灵敏度。

2.快速测定：如果样品NO浓度较高，则可将Griess R1和R2预先1:1等体积混合后，各取100 μl混合试剂与50 μl样品反应测定。

3.样品所赖以存在的液体的内在成分会干扰测定，降低OD值和灵敏度。干扰程度：尿液血清血浆培养基蒸馏水。

4.每次测量必须新做标准曲线，尽量用与样品相同的液体稀释标准品。

5.细胞培养基中酚红的红色颜色不影响测定。

以下为使用普利莱NO检测试剂盒发表的文章，供参考：

1、Ji Y, Sun X, Liu X Y, et al. Toxoplasma gondii: effects of exogenous nitric oxide on egress of tachyzoites from infected macrophages[J]. Experimental parasitology, 2013, 133(1): 70-74.

2、Hong Q, Qi K, Feng Z, et al. Hyperuricemia induces endothelial dysfunction via mitochondrial Na /Ca 2exchanger-mediated mitochondrial calcium overload[J]. Cell calcium, 2012, 51(5): 402-410.

3、Ding Y, Zhang Z F, Dai X Q, et al. Myricetin protects against cytokine-induced cell death in RIN-m5f β cells[J]. Journal of medicinal food, 2012, 15(8): 733-740.