福尔根DNA染色液(Feulgen stain)

简介：

脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有 Feulgen 法、甲基绿-派洛孙法、吖啶橙荧光法等，其中最经典的是 Feulgen 法, Feulgen 法是一种经典的酶组织化字法。BIOISCO Feulgen stain 的原理在于：DNA经温和的弱酸(例如盐酸)水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与 Schiff 试剂结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有 DNA的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基（醌基是一个具有颜色的发色团），所以凡含有DNA的部位，就呈紫红色。但是该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键，因此 RNA 用此法处理后则分解，所以该法不适用于证明RNA。

组成：

保存条件：

4℃,避光保存,6个月有效。

自备材料：

1、蒸馏水或去离子水

2、系列乙醇

3、加热设备

4、染色缸

操作步骤(仅供参考)：

(一) 石蜡切片染色

1、组织固定：Carnoy 固定的石蜡切片较好，10%的福尔马林亦可，不宜使用 Bouin 固定液。

2、弱酸工作液的配制：按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4的比例配制，即取弱酸溶液 1 份、蒸馏水 4 份，充分混合，即获得弱酸工作液。

3、石蜡切片脱蜡至双蒸水。

4、室温下在弱酸工作液中浸洗一下。

5、切片放入已预热到60℃的弱酸工作液，孵育8min。

6、切片放入室温的弱酸工作液中冲洗1min。

7、蒸馏水冲洗。

8、切片入 Schiff reagent 内，置于室温暗处染色30~60min。

9、在上述染色过程中，配制 SO₂水工作液。按照亚硫酸盐溶液：弱酸溶液：蒸馏水=5:1:94

的比例配制 SO₂水工作液，即取亚硫酸盐溶液 1 份、弱酸溶液 1 份、蒸馏水 94 份，

充分混合，即获得 SO₂水工作液。即配即用，不易久置。

10、用新鲜配制的 SO₂水工作液洗切片 3 次，每次 90s。

11、蒸馏水中洗净。

12、经系列乙醇脱水。

13、二甲苯透明并封片。

(二)冰冻切片染色

1、冰冻切片预处理：先用乙酸 1 份、无水乙醇 3 份混合后，即为固定液，固定 10min。

2、由无水乙醇脱水--逐级下行--双蒸水。

3、弱酸工作液的配制：按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4 的比例配制弱酸工作液，即取弱酸溶液1份、蒸馏水4份，充分混合，即获得弱酸工作液。

4、余下步骤同上述石蜡切片染色。

染色结果：

细胞核内DNA：红紫色

阴性对照：

将同样切片经上述步骤， 只有步骤5改为放入室温的弱酸工作液，室温放置 15min。其结果为细胞核 DNA 阴性。

注意事项：

1、水解时间很重要，并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。

固定液	水解时间(min)
Carnoy 固定液	8min
Helly 固定液	8min
Susa 固定液	18min
福尔马林	8min
Zenker 液	5min

2、注意 Schiff reagent 的纯净程度，若变浅粉红亦可考虑使用，颜色变红则不能用。

3、去除切片上多余的 Schiff reagent 的方法应以 SO₂水洗法为好。

4、应作阴性对照试验。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6、本产品仅由于科研，严禁他用。