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Porter法
由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很。因此Porter等人对Bate- Smith法进行了改进。Porter法改进之处主要是在试剂中添加了Fe3+,以提高反应的程度和颜色的稳定性。此方法测定的也是原花青素的相对含量,结果用PVU(porter value unit)表示。porter法的原理同Bate- Smith法。
操作程序
称取适量的葡萄籽提取物(约10~ 30mg)用甲醇溶解,最后定溶于100mL。从中取1mL样品溶液加到10mL比色管中,然后依次加入6mL盐酸-正丁醇(5/95,V/V),0.2mL 2.0%硫酸铁铵溶液(用2mol.L-1的盐酸溶解),在97℃下反应40min后,取出迅速冷却,在550nm处测定其吸光度,以甲醇代替提取物溶液作为空白。
PVU =?A?× 7.2/W。A:吸光度;W:样品质量(g)。
美国葡萄籽方法评定委员会认为葡萄籽提取物的PVU在250~ 350之间是比较理想的。PVU过低,可能说明该产品中原花青素的含量较低;PVU过高,说明该产品中高聚体原花青素含量较高。但由于porter法不能区分测出的是何种原花青素,所以若一种葡萄籽提取物测出的PVU为300,则该产品可能是低聚体原花青素含量较多,也可能是单体和高聚体原花青素含量较多。
美国葡萄籽方法评定委员会认为上述两种方法不能作为葡萄籽提取物中总多酚或原花青素的定量分析方法。