伊文思蓝染色液(1%)

简介：

伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氨蓝，分子式C₃₄H₂₄NcNa₄O₁₄S₄，分子量为960.80，CAS号为314-13-6伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。

组成：

保存条件：

4℃,避光保存,12个月有效。

操作步骤(仅供参考)：

(一)血脑屏障通透性

1、取处理后的实验动物(以小鼠为例) ，静脉注射Evans Blue Stain (1%) , 小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5 ~ 1h后处死小鼠,取目的脑组织。

2、脑组织置于1.5ml离心管中加入1ml PBS，迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，离心

3、取上清，加入等量三氯乙酸, 4°C孵育。该步骤亦可采用如下操作:取上清,按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮、室温孵育24h。

4、离心15min。

5、取上述溶液，用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。

(二)活细胞染色

1、取100μl重悬细胞到常规离心管内，入100μl Evans Blue Stain轻轻混匀染色(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。

2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下:

细胞存活率= (细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数x 100%

注意事项：

1、EvansBlueStain对人体有轻微毒性，请小心防护。

2、细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。

3、血脑屏障通透性实验中,EvansBlueStain注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。

4、最好采用低温冷冻离心机进行离心。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

6、本产品仅由于科研，严禁他用。