糖原D-PAS染色液(淀粉酶消化法)

简介：

糖原染色是病理学中常规的染色方法之一, McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖,该染色试剂盒不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的1 , 2-乙二醇基,使之变为二醛,醛与Schiff 试剂能结合成一种品红化合物,产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质,使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化,这是很关键的步骤。PAS 技术是唯一可检测不同种类的黏液物质(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技术却不能区别黏蛋白和糖原。若要准确鉴别黏液物质(如黏蛋白或糖原) ,需加入糖原消化步骤。大多数情况下可用α-淀粉酶或麦芽淀粉酶来催化糖原的糖苷键水解,形成水溶性的双糖麦芽糖, 在应用PAS技术之前将糖原从组织切片上除去。人类的唾液被认为是消化糖原的一种有效手段，但是出于安全以及缺乏标准唾液的考虑,不主张应用唾液。

BIOISCO糖原D-PAS染色液的特点在于糖原PAS染色之前经淀粉酶处理,糖原消化时需要两张相同的切片,脱蜡后一张切片用含有淀粉酶的适当缓冲液处理 ,另一张仅用缓冲液处理。然后两张切片均用PAS法染色,消化后染色消失表明存在糖原。

组成：

保存条件：

4℃,避光保存,6个月有效。

自备材料:

1、蒸馏水

2、系列乙醇

操作步骤(仅供参考) :

1、两张相同切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇入水。

2、一张切片入 37°C淀粉酶溶液处理1h。另一张不用淀粉酶溶液处理 ,入水中作为对照。

3、流水冲洗两张切片。

4、入过碘酸溶液,室温放置, 一般不宜超过。

5、自来水冲洗,再用蒸馏水浸洗。

6、入Schiff Reagent ,置于室温阴暗处浸染。

7、自来水冲洗。

8、入Mayer苏木素染色液,染细胞核。

9、(可选)酸性乙醇分化液分化。

10、自来水冲洗,更换蒸馏水清洗使其返蓝。

11、二甲苯透明,中性树胶封固。

染色结果:

糖原、中性,唾液黏蛋白	红紫色
各种糖蛋白	红紫色
细胞核	蓝色
未处理的切片：糖原呈亮红色或红紫色	淀粉酶处理的切片：糖原阴性。

注意事项:

1、切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。需使用一张阳性对照片验证酶的活性。

2、过碘酸氧化时间不宜过久,氧化时温度以18 ~ 22°C最佳。

3、试剂(A). 试剂(B)、试剂(C)、应置于4°C密闭保存,使用时避免接触过多的阳光和空气，使用前最好提前取出恢复到在室温后,避光暗处使用。

4、酸性乙醇分化液应经常更换新液,其分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和酸性乙醇分化液的新旧而定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够。

5、在过碘酸溶液和 Schiff Reagent中作用时间非常重要, 该依据切片厚薄、组织类别等决定。

6、冷冻切片染色时间尽量要短。

7、为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套。

8、本产品仅用于科研，严禁他用。