一氧化氮合酶染色液

简介：

细胞中的左旋精氨酸和氧在一氧化氮合酶(Nitxic oxide synthase，NOS)的作用下生成一氧化氮和瓜氨酸。一氧化氮合酶染色液由磷酸盐缓冲、漂洗、孵育、复染等步骤，可用于组织冰冻切片染色，尤其适用于脑组织冰冻切片染色,亦可用于细胞爬片、细胞涂片染色。

组成：

保存条件：

4℃,避光保存,6个月有效。

操作步骤(仅供参考)：

(一)、脑组织冰冻切片:

1、动物常规灌注固定，取取脑组织,浸入30%蔗糖溶液，行冰冻切片厚度40μm。

2、入TissuePBbuffer漂洗10min,复1次。

3、用蒸馏水稀释Wash buffer(6x)至1x，切片入1xWash buffer ,室温孵育。

4、入NOS孵育液,并放入湿盒中，37°C避光孵育3h。

5、用蒸馏水稀释Wash buffer(6x)至3x，切片入3xWash buffer , 4°C孵育过夜。

6、入Tissue PB buffer ,漂洗，重复1次。

7、裱片、晾干。

8、可选步骤:入中性红染色液复染1 ~ 2min.

9、常规脱水、透明、封片、镜检。

(二)、细胞爬片:

1、细胞爬片或甩片用Cell PB buffer漂洗5min，重复1次。

2、4%多 聚甲醛室温固定30min.

3、入CellPBbuffer漂洗，重复1次。

4、按上述脑组织冰冻切片步骤3~ 5操作。

5、入CellPBbuffer漂洗,重复1次。

6、可选步骤:入中性红染色液复染1 ~ 2min。

染色结果:

NOS部位：蓝黑色

背景：红色(中性红)或淡蓝色

注意事项:

1、应选择恰当的固定液、固定方法、固定时间，否则会影响酶的活性。

2、中性红复染可以更好的显示细胞轮廓，有助于进一步计数阳性细胞率。

3、组织切片染色时,可见NOS神经元，类似于Golgi银染,胞体、神经纤维、纤维末梢均可着色。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅由于科研，严禁他用。