碱性磷酸酶-PAS 联合染色液

简介：

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称 ALP 或 AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，

其活性所需最适 pH 9.2～9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉膜之内皮。此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。1946年 McManus 最先使用 PAS 法显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖。氧化剂能氧化糖类及有关物质中的 1,2-乙二醇基使之变为二醛，醛与 Schiff 试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。由于氧化剂还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好浓度和氧化时间，使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化。

ALP-PAS 联合染色液不仅能够显示碱性磷酸酶活性位点和糖原等物质，亦能区分二者。冰冻切片及石蜡切片均可。

组成：

保存条件：

4℃,避光保存,6个月有效。

自备材料：

1、蒸馏水

2、温箱或水浴锅

操作步骤(仅供参考)：

1、石蜡切片脱蜡至水，冰冻切片直接入水。

2、冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内，4℃固定 2~5min。

3、切片入 ALP 孵育液(阴性对照切片入 ALP 对照液)， 置于 37℃温箱。冰冻切片孵育 5-15min，石蜡切片孵育 2-12h。流水洗 2min 后入蒸馏水。

4、入 Co 溶液，置于 37℃温箱染色 5min。 流水洗 5min 后入蒸馏水。

5、上述过程中配制 ALP 硫化工作液，即取试剂(C)用蒸馏水稀释即为 ALP 硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育 1-2min。

6、流水洗 10min 后入蒸馏水。

7、入氧化剂室温氧化 5-10min。蒸馏水换洗。

8、入 Schiff 试剂，置于温箱染色 10-15min。

9、亚硫酸溶液:蒸馏水按 1:10 的比例配制亚硫酸工作液，清洗 2min，入蒸馏水洗 5min。

10、冰冻切片直接用甘油明胶封片，石蜡切片脱水。常规透明，中性树胶封片。

染色结果：

碱性磷酸酶活性部位：黑色

PAS 阳性物质：紫红色

阴性对照(可选)：

1、ALP 对照液为不含底物的孵育液。取相同的切片入ALP 对照液，其余同上。结果为阴性。

2、(备选方案)切片进入 ALP 孵育液前，可先经碘液和 5%硫代硫酸钠溶液各 3min，充分水洗后再进行孵育等步骤，可用此法作阴性对照。

注意事项：

1、本染色液适用于冰冻切片、石蜡切片。染色过程中注意控制氧化剂的处理时间，否则容易褪色。

2、碱性磷酸酶显色后，经氧化剂应特别小心，严格控制时间，否则褪色。

3、ALP 孵育液、ALP 硫化液易失效，最好分成小分储存，一经开启立即使用。

4、ALP 硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。

5、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7、本产品仅由于科研，严禁他用。