碘化丙啶 PI 染色液(1mg/ml)

简介：

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链 DNA 和 RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶与双链 DNA 结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链 DNA 的含量成正比。细胞内的 DNA 被 Propidium Iodide 染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行 DNA 含量测定，然后根据DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。碘化丙啶 PI 染色液(1mg/ml) 主要由 PI、破膜剂等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测， 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。

组成：

保存条件：

-20℃,避光保存,12个月有效。

操作步骤(仅供参考)：

1、细胞样品的制备：

⑴贴壁细胞：

① 收集上述细胞悬液到离心管内。

② 4℃离心，使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃，可留大约 50 μl 培养液，以免吸走细胞。

③ 加入约 1ml 提前预冷的 PBS ，重悬细胞，并转移至 1.5ml 无菌离心管。

④ 4℃离心，使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约 50 μl PBS，以免吸走细胞。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

⑵悬浮细胞：

① 4℃离心，使细胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丢弃，可留大约 50 μl培养液，以免吸走细胞。

③ 加入约 1ml 提前预冷的 PBS ，重悬细胞，并转移至 1.5ml 无菌离心管。

④ 4℃离心，使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约 50 μl PBS，以免吸走细胞。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

2、细胞的固定：

加入1ml 冰浴预冷 70% 乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定 2h 或更长时间。4℃固定 12 ～24h 可能效果更佳。

3、细胞的清洗：

① 4℃离心，使细胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丢弃，可留大约 50 μl溶液，以免吸走细胞。

③ 加入约 1ml 提前预冷的 PBS ，重悬细胞，并转移至 1.5ml 无菌离心管。

④ 4℃ 离心，使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约 50 μl PBS，以免吸走细胞。

4、PI染色：

在每个待检细胞样品中加入500 μl配制好的 PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉淀，置于 37 ℃避光水浴 30min 。

5、检测与分析：

用流式细胞仪在激发波长 488nm 波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞 DNA 或 RNA 含量分析和光散射分析。

注意事项：

1、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。

2、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

3、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当提高离心力或延长离心时间。

4、如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化后，制备成单细胞悬液，才可以进行检测。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6、本产品仅由于科研，严禁他用。