Homo-NH2均匀的、但分散的表面具-NH2官能团的超顺磁微粒，由Fe3O4核和GMA涂层组成。通过GMA修饰，-NH2基团通过短的亲水性连接臂连接到磁珠上。亲水表面确保磁珠在各种缓冲液中具有出色的分散性和易操作性。表面具有反应性胺基的磁珠允许配体如蛋白质、肽、碳水化合物或其它特异性分子的固定。配体的固定可通过醛或酮的还原胺化而不预先活化磁珠表面。或者，EDC交联剂可用于羧基将配体与胺偶联。最后，胺反应性双功能交联剂用于引入其它官能团以偶联配体。

1. HomoS-NH2

基团密度 600 umoles amine/g beads

2. HomoL- NH2

基团密度 300 μmoles amine/g beads

直径：1μm

常温运输，正确使用保存期一年。

方案1.用于连接醛和酮

p class="MsoNormal" align="left" background-color:#ffffff;text-indent:18pt;"="" style="box-sizing: border-box; margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;"含有醛和酮的配体可通过形成Schiff"s碱与氨基磁珠偶联，并用氰基硼氢化钠还原胺化。醛基可通过高碘酸钠氧化糖蛋白中的糖残基或多糖中相邻羟基的C-C键的裂解而容易地制备。

缓冲液

5M Sodium Cyanoborohydride in 1M NaOH;

1. 彻底重悬氨基磁珠并转移足量磁珠到干净EP管中。磁分离，并吸弃上清液。从磁力架上取下EP管，加入200μl偶联缓冲液重悬磁珠。磁分离，并吸弃上清液。

1. 将配体溶解偶联缓冲液中至浓度1-10 mg/ml。

3. 每100μl反应混合物中加入1μl的5M氰基硼氢化钠（溶于1M NaOH溶液），室温下孵育2小时。磁分离，并吸弃上清液。

5. 加入适量的PBS并混匀磁珠。磁分离，吸弃上清液。

最常见的一类活化剂是NH。根据交联剂的性质，可与待固定的配体中的化学基团反应，包括胺、巯基、羧基和羟基以及非选择性光反应。NHS交联剂通常必须在使用前新配。与待固定的配体量相比，使用10倍摩尔过量。

偶联缓冲液Coupling Buffer(0.1 M sodium phosphate buffer with 0.15 M NaCl, pH 7.4);

1. 彻底重悬氨基磁珠并转移足量磁珠到干净EP管中。磁分离，并吸弃上清液。从磁力架上取下EP管，加入200μl偶联缓冲液重悬磁珠。磁分离，并吸弃上清液。

1. 用偶联缓冲液重悬氨基磁珠。

2. 根据说明溶解NHS，并将所需体积加入磁珠，混匀。可将水溶性NHS直接加入磁珠中。终体积应等于瓶中最初的液体体积。

4. 磁珠活化完成。

方案2-1.用-NH2反应性的NHS-酯交联剂活化后偶联

1. 重新悬浮活化的氨基磁珠。使用相同的缓冲液将体积调整到所需的磁珠浓度。

3. 室温下孵育30分钟或4°C下缓慢倾斜旋转2小时。

5. 加入0.05M 的Tris（pH7）并在室温下温育15分钟以猝灭未反应的活性氨基。

巯基活性基团通常是吡啶二硫基或碘代/溴代乙酰基。寡核苷酸也可使用马来酰亚胺。适当的缓冲液和孵育条件与巯基反应，配体须含待固定的游离巯基。

2. 加入计算量的游离巯基配体，涡旋混匀。

4. 孵育后，可加入半胱氨酸至终浓度为5mM以淬灭未反应基团。室温下孵育15分钟。

SH-reactive group	Recommended buffer	Recommended condition
Maleimide	0.1M sodium phosphate pH 6.5-7.5	4 h at 4℃ or 2 h at room temperature
Iodo/Bromoacetyl	0.05M sodium borate pH8.3	1h, room temperature. Protect from light.
Pyridyldithio	Phosphate buffered saline (PBS) pH7.5	Over night at room temperature

方案2-3.用光反应性的NHS-酯交联剂活化后偶联

1. 重新悬浮活化的氨基磁珠。根据活性基团选择缓冲液。用相同缓冲液将体积调整到所需的磁珠/配体浓度。

3. 使用推荐的时间、温度、适当波长的光照射。

3. 将偶联的磁洗两次。

在配体中不存在其他伯氨基的条件下，可通过使用EDC或EDC / NHS（或其它碳二亚胺）将磁珠表面的胺基和配体中的羧基连接在一起。 EDC与羧基反应形成胺反应性中间体，该中间体在水溶液中不稳定。为了稳定，可引入NHS。

缓冲液

注意：对于使用EDC的偶联反应，避免使用含游离胺或磷酸盐的缓冲液，因为这会干扰偶联效率。Tris，乙酸盐和甘氨酸缓冲液都易与EDC或偶联中间体反应。还应避免含硫醇缓冲液，因为它们不可逆地结合EDC并抑制偶联。

Sulfo-NHS or N-hydroxysuccinimide (NHS);

PBS;

偶联羧基配体

2. 将配体溶解在上述偶联缓冲液中至1–10 mg / mL的浓度，并加入推荐量的配体至上述磁珠，移液器吹打混匀。

4. 注：EDC溶液和NHS溶液应新配，避光保存在冰上。

6. 在室温下孵育2h，或在4°C下缓慢倾斜旋转孵育2h。

封闭磁珠

2. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。

4. 加入500μL的PBS（pH7.4）重悬磁珠。将EP管置于磁力架60秒，并吸弃上清液。重复洗涤2次。

附录1：

1. 将至少100μl含有靶抗原的细胞裂解物样品加入到来自步骤6的磁珠管中并涡旋10秒。

3. 采用SDS-PAGE和蛋白质印迹分析，加入适量的SDS-PAGE上样缓冲液并在95°C加热磁珠5分钟。将磁珠/上样缓冲液混合物直接加到SDS-PAGE凝胶上，并按正常进行电泳和印迹。

B．抗体和抗原的排除：向磁珠、抗体、抗原混合物中加20μl洗脱液重悬磁珠。室温下孵育2min。磁分离，收集上清液到新EP管，加入2μl中和缓冲液（如1M Tris-HCl，pH8.5）调pH。

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