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BK2021081105	CAS	BK2021081105			100		0

一、蛋白纯化方案

l 建议将一水磷酸二氢钠和七水合磷酸氢二钠用于预处理缓冲液和结合/洗涤缓冲液配制。

l 避免高浓度的盐或螯合剂如EDTA，因为它们会阻止蛋白质与磁珠结合。

磷酸盐缓冲液中氯化钙浓度: 0.3 mM calcium chloride for 10 mM phosphate buffers; 0.01 mM calcium chloride for 300 mM phosphate; 0.0075 mM calcium chloride for 400 mM phosphate.

l 结合/洗涤缓冲液: 10 mM Sodium phosphate, pH 6.8, 0.3 mM calcium chloride

A.样品准备：将蛋白质样品置于50倍体积的结合缓冲液进行透析。

1）摇动瓶子，使磁珠完全重悬。将40μl磁珠（2mg）转移到离心管中。磁分离，除去上清液。

3）从分离器中取出离心管，用200μl结合/洗涤缓冲液重悬磁珠。磁分离，除去上清液。重复该步骤一次。

C.样品结合

2）将试管放在磁分离器上1-3分钟，除去上清液。

D.蛋白质洗脱：注意：蛋白质可用浓度逐渐增加的磷酸盐缓冲液（10-600 mM）和/或pH梯度（5.5或更高，达到样品蛋白质的稳定性极限）或NaCl用于碱性蛋白质洗脱，但是不是酸性蛋白质。

2）将管置于磁分离器上1-3分钟，将含洗脱蛋白的上清液转移到新离心管中。

二、DNA纯化方案注意：对于所有缓冲液配制，建议采用一水磷酸二氢钠和七水合磷酸氢二钠。避免使用无水磷酸钠，因为这些盐含有焦磷酸盐，会阻止某些大分子结合。

l ?结合/洗涤缓冲液：100 mM phosphate buffer pH 7, 4 M guanidine hydrochloride

l ?稀释缓冲液：0.2 M phosphate buffer pH 7

Sample	Soft tissue	Hard tissue	Plant tissue	Fungi	Yeast	Bacterium
Liquid nitrogen
Frozen grinding
Homogenize
Lysozyme
Lyticase, zymolase
Sonication
Glass bead grinding

2）在室温下以13,000rpm离心3~5分钟除去细胞碎片。将上清液转移到新管中，用2×稀释缓冲液将上清液浓度调至4M盐酸胍。

1）摇动瓶子，重悬磁珠。将20μl-30μl磁珠（50mg / ml）转移至离心管中。磁分离，除去上清液。

3）用100μl结合/洗涤缓冲液重悬磁珠。

1）将样品与磁珠混合，室温下温育10-15分钟，同时轻轻旋转。磁分离，除去上清液。

D. DNA洗脱：从分离器中取出离心管，用10-50μl洗脱缓冲液重悬磁珠，在室温下放置3分钟。磁分离，然后将含有洗脱DNA的上清液转移到新试管中。

1）向洗脱的DNA溶液中加入等体积的d2H2O。加入0.1倍体积的5M乙酸铵和2.5倍体积的100%EtOH，使DNA在-20℃下沉淀至少15分钟（优选1小时或更长）。

4）以13,000rpm离心15分钟。丢弃上清液。让DNA风干（15分钟即可）。将DNA重悬于适量的d2H2O或TE缓冲液中（注意：基因组DNA不易溶解，65°C下5分钟有助于溶解）。

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