货号 | CAS号 | 编号 | 包装 | 参数 | 库存 | 补货期 | 价格 |
BK2021081111 | CAS | BK2021081111 | 5 ml | 浓度:25 mg/ml,直径:1.2±0.2 μm,溶剂:水 | 1000 | 2300 |
蛋白磷酸化参与多种细胞过程,约30%蛋白可实现磷酸化修饰。很多研究聚焦于蛋白的翻译后修饰。然而,因磷酸化肽丰度低、化学计量低和理化特性特殊等因素,导致长期以来蛋白质组尺度上的磷酸化研究都是蛋白质组学研究的一个重要挑战。因此,当前迫切需要能特异富集磷酸化肽、且与质谱分析兼容的富集技术。
l 对磷酸化肽高特异性;
l 小于10s的快速磁响应性,减少样品损失,更适合自动化操作;
2.产品信息
洗涤缓冲液(Wash buffer): 80% ACN, 1% TFA ;
影响磷酸肽结合的因素包括:缓冲液的组成、pH值以及是否存在污染物/干扰化合物。磁珠使用量应根据应用进行优化,建议使用过量的含磷酸肽样品使磁珠饱和。
3.1Si-TiO2磁珠的平衡
1)涡旋混合Si-TiO2磁珠以确保均匀分散。
3)将离心管放在磁分离器上,放置30秒,移弃上清。
5)将离心管放在磁分离器上,放置30秒,移弃上清。
7)用100μl的1%NH4OH轻轻洗涤微粒(例如间或涡旋混合)10分钟。
9)50μl上样缓冲液平衡磁珠60秒。
11)重复第9步和第10步两次,共三次平衡。
3.2磷酸肽富集过程
注意:若磷酸肽为固体,请用不低于100μl的上样缓冲液溶解。
3) 室温孵育20分钟,过程中确保样品和磁珠的混合悬浮。
5) 100μl的上样缓冲液温和洗涤30秒,去除未结合的样品。
7) 100 μl洗涤缓冲温和洗涤2分钟,去除非特异性结合的多肽。
9) 重复第7步和第8步2次,共洗涤3次。
11) 80μl洗脱缓冲液洗脱15分钟,确保洗脱过程中磁珠的悬浮和混合。
13) 将离心管放在磁分离器上,放置30秒,移取上清到一新离心管。
15) 用质谱分析样品。质谱分析前,可对样本脱盐(如C18),浓缩(如真空离心或冻干)。
1. Bin Luo, Lingzhu Yu, Zhiyu Li, Jia He, Chunjie Li, Fang Lan and Yao Wu, Complementary multiple hydrogen-bond-based magnetic composite microspheres for high coverage and efficient phosphopeptide enrichment in bio-samples, J. Mater. Chem. B, 2020, 8, 8414-8421(Si-TiO2用于磷酸化蛋白富集)
2. Liu, J., Lu, H., Hua, X., Gu, Y., Pan, W., Dong, D., Liang, D., 2021. Direct analysis of metabolites in the liver tissue of zebrafish exposed to fiproles by internal extractive electrospray ionization mass spectrometry. Analyst. (Si-TiO2用于磷酸化蛋白富集)
3. Binbin Wang, Weida Liang, Hongze Liang, Bin Liu, Qiyao Wang, Yinghua Yan, Tingting Wang, Yufei Jiang, Yinli Jiang, Hongda Qiu, Liheng Lu, Wei Cui, Yuan Zhou, Lingling Zhao, and Haibin Yu. Phosphonate-Functionalized Ionic Liquid: A New Surface Modifier Contributing to the Enhanced Enrichment of Phosphorylated Peptides, ACS Sustainable Chemistry Engineering 2021 9 (23), 7930-7940,DOI: 10.1021/acssuschemeng.1c02119 (Si-TiO2用于磷酸化蛋白富集)
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