G-Oligo (dT)25磁珠用于从总 RNA或直接从动物组织、植物细胞中快速分离出高纯度且完整的mRNA。可以广泛应用到各种样品中。磁珠上的 oligo-dT 与 mRNA的 polyA杂交，仅需几步洗涤、洗脱和磁分离，即可获得高纯度的mRNA。所有操作都在单管中一次完成，操作简单易行。

二、产品特性

结合能力：~2 ug mRNA/mg bead

浓度：5 mg/mL

储存：2~8 °C保存，勿冻结。常温运输，正确使用保存期一年。

三、缓冲液

裂解/结合缓冲液：100 mM Tris-HCl, pH 7.5, 500 mM LiCl, 10 mM EDTA, 1% LiDS, 5 mM dithiothreitol (DTT).

洗涤液B：10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA 10 mM Tris-HCl, pH 7.5.

四、注意事项

器材：在实验器材允许情况下，对一次性塑料制品高温高压湿热灭菌处理。在使用玻璃器皿的情况下，请干热灭菌，或在0.1% DEPC溶液中，37℃下浸泡12h，再高温高压湿热灭菌（121℃，30分钟）。

五、操作流程

（1）将磁珠悬液漩涡振荡30 s，使磁珠充分重悬；

（3）加入1mL结合缓冲液重悬磁珠，用移液器缓慢吹打5~10次或漩涡震荡30 s，磁分离，去上清。

对应样品	样品量	磁珠量
动物组织	~50 mg	100μL
植物组织	~100 mg	100μL
培养细胞	~1×107	100μL
总RNA	~100μg	100μL

a. 将所需量的植物或动物组织在液氮中研磨成粉末，保持冷冻状态，避免RNA降解。

c. 在室温下以14,000rpm离心1 min，并将所有上清液转移至一个新的EP管。上清液可用于mRNA纯化，或保存在-80℃备用。

a. PBS缓冲液中清洗细胞，室温下以4,000rpm离心5min沉淀细胞并丢弃上清液。

c. 通过DNA剪切降低粘度。用1-2注射器通过21#针头三次吸入和吸出剪切裂解液中的DNA来降低溶液粘度。可能会产生泡沫，但不影响mRNA的得率。

a. 制备动物/植物组织裂解液或从培养细胞和细胞悬浮液中制备裂解液。

c. 将裂解液与磁珠混合（参考样品对照表），室温下旋转混合3-5分钟。

e. 室温下分别用1ml洗涤液A和1ml洗涤液B清洗磁珠，去除可能的污染物。

如果分离mRNA用于酶促下游应用（例如固相cDNA合成），洗涤液B（500μL）洗涤一次，随后用酶缓冲液洗涤一次，可用于下游应用。

（以纯化75ug Total RNA中mRNA为例）

b. 65°C孵育2min，打开RNA二级结构，结束后迅速置于冰上。

d. 磁分离，静置2min，去上清。

f. 加入10～20μl 的10mM Tris-HCl，75~80°C孵育2min，然后快速将含有mRNA的上清液转移到新的RNase-free的EP管。

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