HEPES 缓冲盐溶液(2×HeBS,pH7.05)

简介：

HEPES 即 4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid，中文名称N-(2-羟乙基)哌嗪- N'-2 磺酸，分子式为 C₈H₁₈N₂O₄S，分子量为 238.31，HEPES 是一种非离子两性缓冲剂，能有效控制pH 在 6.8～8.2范围， 尤其在 pH7.2～7.4 具有较好的缓冲能力，终浓度一般为 10～50mmol/L，培养液内20mmol/LHEPES 即可达到较好的缓冲能力。

BIOSICOHEPES 缓冲盐溶液(2×HeBS,pH7.05)是常用的一种细胞转染试剂，亦可用于其他用途，经过无菌处理。HEPES 缓冲盐溶液用于转染时，其最适 pH7.05～7.12，在此范围内均可，如果有必要可以检测其转染效率。

组成：

保存条件：

-20℃保存,12个月有效。

主要成分：

主要由HEPES、氯化钠、磷酸盐、去离子水等组成，经过滤除菌。

自备材料：

1、培养皿

2、培养液

3、病毒质粒 DNA

4、氯化钙溶液，亦可采购 BIOSICO的氯化钙溶液(2.5mol/L,无菌)。

操作步骤(仅供参考)：

1、以病毒转染 293 细胞为例，转染前24h，接种适量的293细胞接种于6cm 培养皿中，其接种密度应为 2.5×104细胞/ml。

2、转染时先吸除培养液，更换新鲜培养液，其细胞汇片应到 80%左右，并尽量避免细胞成团。

3、按 6～10μg 病毒质粒 DNA 溶解于无菌水，其终体积为 438μl，加入无菌的2mol/L氯化钙 62μl，合计500μl。

4、加入 2×HeBS(pH7.05) 500μl到上述含有 DNA 的 500μl溶液中，轻轻且充分混匀。加入到细胞中，轻轻转动培养皿使其混匀。

5、继续培养细胞，24h 时更换新鲜培养液，使细胞汇片接近 100% (一般需要 24h～48h)。

6、转染 48h 后，轻轻吸除细胞培养的黄色上清。

7、(可选)如有必要，4℃ 500g离心5min，弃沉淀，收集上清。

8、收集的病毒上清 4℃保存1～2h 后，-80℃保存。

9、37℃孵育后使用，进行下游实验。

注意事项：

1、注意无菌操作，尽量避免污染。

2、加入2×HeBS(pH7.05) 500μl到上述含有 DNA 的 500μl溶液后，应在 1～2min 内加入到细胞中，时间间隔不宜过久，以免影响转染效果。

3、转染12～24h后，可以加入终浓度为10mmol/L的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。

4、收集病毒上清时，可以每隔12h收集一次，但同时应补足培养液。这种情况下，病毒滴度没有明显下降。

5、4℃ 500g 离心5min收集上清目的在于去除活细胞。

6、该试剂用于转染时，应检测其转染效率，好的转染效率应介于30～60%之间。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

8、本产品仅由于科研，严禁他用。