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伊势久生物 亚铁氧化酶 HP 检测试剂盒 分光法 50T/24S 微量法 100T/48S 科研专用

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上海舟福科贸有限公司
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亚铁氧化酶(Hephaestin,HP)试剂盒说明书

分光光度法 50/24

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

Hephaestin (HP)作为铜蓝蛋白的同系物,是近年来发现的铁转运蛋白亚铁氧化酶,HP属亚铁氧化酶家族成员,具有亚铁氧化酶的活性,参与体内铁代谢。HP的表达可受铁、铜及锌等金属离子的调节。HP催化Fe2 氧化生成Fe3 ,在介导铁的跨膜转运中有重要作用。

测定原理:

HP催化Fe2 氧化为Fe3 Fe2 ferrozine反应显色,在560 nm下有特征吸光值。通过测定Fe2 的减少速率可测得亚铁氧化酶的活性

试剂组成和配制:

产品名称

OT016-50T/24S

Storage

试剂一:液体

50ml

4℃

试剂二:粉剂

3ml

4℃

试剂三:粉剂

30ml

4℃避光

说明书

一份

需自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取:

按照组织质量(g):水ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml蒸馏水),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至560 nm,蒸馏水调零。

2、在玻璃比色皿中加入下列试剂:

试剂名称(μl

测定管

对照管

试剂一

250

250

试剂二

50

50

样本

50

50

蒸馏水

150

150

试剂三

混匀,40℃静置30 min

500

试剂三

500

混匀,立即测定A对照和A测定,ΔA=A对照-A测定。(每个测定管需设一个对照管)

HP活性计算:

标准曲线:y = 16.427x - 0.0006R2= 0.9998(x为标准品浓度,μmol/mly为吸光值ΔA)

(1)按样本质量计算

单位定义:每g样本每分钟氧化1nmol Fe2 定义为一个酶活力单位。

HPnmol/min/g 鲜重)=△A 0.0006÷ 16.427×V÷T ÷(W× V÷V样总)× 1000= 20.29×△A 0.0006÷W

2)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg蛋白每分钟氧化1nmol Fe2 定义为一个酶活力单位。

HPnmol/min/mg prot=△A 0.0006÷ 16.427×V÷T ÷Cpr×V样)× 1000= 20.29×△A 0.0006÷Cpr

V总:反应体系体积,0.1 mlV样:加入样本体积0.01 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,30minW:样品质量,gCpr:样本蛋白浓度,mg/ml1000μmolnmol的转换系数。

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