土壤碱性木聚糖酶(Soil Basic Xylanase,S-BAX)测定
试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,BAX一般分离自最适生长pH为9 -11的微生物。
测定原理:
BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。
组成:
产品名称 |
SSQ094-50T/24S |
Storage |
缓冲液:液体 |
20ml |
4℃ |
试剂一:液体 |
5ml |
4℃避光 |
试剂二:液体 |
25ml |
4℃避光 |
说明书 |
一份 |
自备仪器和用品:
天平、常温离心机、震荡仪、恒温水浴锅,可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿。
样品处理:
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定操作表:
对照管 |
测定管 |
|
土样(g) |
0.1 |
0.1 |
缓冲液(μl) |
600 |
400 |
试剂一(μl) |
200 |
|
混匀,50℃震荡反应30min,立即90℃水浴10min,8000g,25℃离心10min,取上清500μl |
||
试剂二(μl) |
500 |
500 |
混匀,90℃水浴中显色5min,1ml玻璃比色皿,对照管调零,测定A540。 |
S-BAX计算公式:
标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293,R2= 0.9985
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克土壤每天分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酶活单位。
S-BAX活力(μmol/d/g 土样)=(A540 0.0293)÷ 2.8432×V反总×103÷ W÷T÷ 150
= 67.53×(A540 0.0293)÷ W
V反总:反应总体积,0.6ml;T:反应时间,1/48d;1000:1mmol/L =103μmol/L;150:木糖分子量。
注意事项:
1. 保证震荡反应30min,使酶与底物充分接触。
2. 注意90℃水浴防止爆开,以免改变反应体系。