血红蛋白检测试剂盒 (微板法 )

简介：

血红蛋白 (Hemoglobin ，Hb 或 HGB) 是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是能使血液呈红色的蛋白。血红蛋白由四条链组成,两条α链和两条β链,每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。

Hb在氧含量高的区域,容易与氧结合；在氧含量低的区域,又容易与氧分离。血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。

BIOISCO血红蛋白检测试剂盒 (微板法 )( Hemoglobin Colorimetric Assay Kit) 其检测原理是血红蛋白中亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用，可在氧化剂的作用下催化显色底物，在酸性条件下产物呈红色，吸收峰，产物红色越深，说明Hb 含量越高，反之则越低,通过酶标仪测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出血清血红蛋白含量水平。该试剂盒主要用于检测溶血血清样本，亦可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液等中血红蛋白含量。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

产品名称	KB031-100T	Storage
试剂 (A): Hb Assay buffer	5ml	-20℃ 避光 ℃ 避光
试剂 (B): 显色底物	100μl	RT
试剂 (C): Acid Assay buffer	17ml	RT
试剂 (D): Hb(1mg/ml)	50μl	-20℃ 避光 ℃ 避光
试剂 (E): ddH2O	1ml	RT ℃ 避光
说明书	1份

存储条件：

按要求保存，半年有效。

自备材料：

生理盐水、96 孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪

操作步骤（仅供参考）：

1、 配制检测工作液：

①配制标准品工作液：取出Hb(1mg/ml)恢复至室温，准确取，加入ddH2O，即为标准品工作液 (13.2 μg/ml)。

2 、 准备样品：

①溶血标本血清：溶血血清按照常规方法制备后，-20 ℃冻存。使用时用生理盐水稀释。

②细胞或组织样品：取恰当的细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，20 ℃冻存。

3、 Hb加样：按照下表设置96 孔板空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的血红蛋白含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔，尤其是标准品应作三复孔。

加入物(μl)	空白孔	标准孔	测定孔
ddH 2O	8	—	—
标准品工作液	—	8	—
待测样品	—	—	8
显色工作液	40	40	40
轻轻混匀，37 ℃恒温准确孵育10min
Acid Assay buffer	160	160	160

4、 酶标仪检测：530nm 处吸光度即A530 ，如果无法检测，亦可检测吸光度，一般应数小时内检测完毕。

计算结果：

血清血红蛋白 (mg/L)= 待测样品吸光度 / 标准品吸光度× 13.2 ×100(mg/L)

注意事项：

1、Hb(1mg/ml)和标准品工作液 (13.2 μg/ml)均应 -20 ℃保存，同时应避免反复冻融。

2、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色杯的最小检测体积，尽量采用小体积的比色杯。

3、1 支显色工作液配制后应尽快用完，因此请注意适当多准备一些样品一起检测。