无机磷检测试剂盒（米吐尔钼蓝比色法）

简介：

血清中的无机磷(Inorganic phosphorous)主要由H₂PO₄^-和HPO₄^2-两种磷酸根阴离子组成，世界贸易组织(WHO)推荐的常规检测方法为比色法，我国卫生部临检中心推荐的常规方法为硫酸亚铁钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法。体内许多重要的物质如某些蛋白质、脂类化合物、核酸、辅酶等都含有磷。在酸碱平衡中，磷酸盐亦具有重要的作用。

伊势久生物无机磷检测试剂盒（米吐尔钼蓝比色法）利用无机磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵，后者被米吐尔还原成蓝紫色的复合物。通过分光光度计检测610nm处吸光度值，根据公式计算出无机磷含量。主要用于定量检测无机磷，亦可用于尿液检测。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

保存条件：

试剂(A): 磷标准(1mg/ml)4℃保存；试剂(B): 标准品稀释液4℃避光保存；试剂(C): Pi Assay buffer、试剂(E): ddH₂O常温保存；试剂(D)：米吐尔常温避光保存。

一年有效。

操作步骤（仅供参考）：

1、 （选做）制备样品：

①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于Pi的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Pi的检测。

③高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Pi，可以蒸馏水稀释。

④（选做）样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的Pi含量。

2、制备磷标准工作液：取适量的磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：标准品稀释液=1:24的比例稀释，即获得磷标准工作液(1.292mmol/L)，-20℃冻存，用于Pi的检测。

制备米吐尔钼蓝显色工作液：

3、取1支的米吐尔，充分溶解于50ml Pi Assay buffer，即为米吐尔钼蓝显色工作液。配制后的该溶液应4℃避光保存，一般建议1周内用完。

4、Pi检测：按下表操作。

5、 混匀，水浴，分光光度计650nm处检测，比色杯光径1.0cm，以空白管调零，读取各管吸光度值。

计算:

血清、血浆中无机磷计算公式：磷(mmol/L)=(A测定/A标准)×1.292

组织中磷计算公式：磷(mmol/mg)=(A 测定/A 标准)×1.292/待测样品蛋白浓度(mg/L) 参考区间：

健康成年人血清磷浓度：0.96-1.62mmol/L(3-5mg/dl)

儿童血清磷浓度：1.45-2.1mmol/L(4.5-6.5mg/dl)

注意事项：

1、 米吐尔钼蓝显色工作液配制完成后，尽快使用，放置过久会导致正常血清液产生轻度浑浊。

2、 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。