木质素(Lignin)含量试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
木质素是构成植物细胞壁的成分之一,是由聚合的芳香醇构成的一类物质,存在于木质组织中,主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁。木质素主要位于纤维素纤维之间,起抗压作用。
测定原理:
木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰,280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。
试剂组成和配制:
产品名称
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OT035-100T/96S
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Storage
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试剂一:液体
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50ml
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4℃
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试剂二:液体
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50ml
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4℃
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试剂三:液体
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100ml
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4℃
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说明书
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一份
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自备仪器和用品:
天平、40目筛,玻璃试管、烧杯、离心机,恒温水浴锅、封口膜、烘箱、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、高氯酸,浓硫酸。
样品处理:
样品80℃烘干至恒重,粉碎,过40目筛,称取约2mg(记为W)于10ml玻璃试管中(务必用玻璃试管,不可用Ep管)。
测定步骤:
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空白管
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测定管
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样本(mg)
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2
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试剂一(μl)
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500
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500
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高氯酸(μl)
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20
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20
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于10ml玻璃试管中,用封口膜密封,充分混匀,80℃水浴40min,每隔10min震荡一次,然后自然冷却
试剂二(μl)
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500
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500
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充分混匀
上清(μl)
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20
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20
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试剂三(μl)
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980(参照注意事项四)
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980(参照注意事项四)
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取200μl于微量石英比色皿/96孔板,测定280nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管,ΔA=A测定管-A空白管
计算公式:
标准曲线:y = 0.0347x+0.0068,R2=0.9889
Lignin(mg/g干重)= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反总×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068)÷0.002×50
V反总:反应总体积:1.02ml;W:样本质量,g;T:稀释倍数
注意事项:
1、试剂一有毒性,请操作时做好防护措施,加热前必须用封口膜密封,以防气体溢出。
2、加热过程中有剧烈反应,震荡时轻摇,以免压力过大喷出造成人身伤害。
3、试剂三具有强刺激性,建议操作过程全部在通风橱子操作。
4、取上清加试剂三步骤根据自己样品乙酰化程度,试剂三的用量可调整,吸光值在0.1-0.8之间即可,并在公式中参与计算。