植物膜蛋白提取试剂盒

产品简介：

植物膜蛋白提取试剂盒是一种提取和稳定膜蛋白的试剂盒。该试剂盒可以从植物组织中高效提取和稳定G偶联蛋白受体（GPCR）和其他膜相关蛋白，同时保持长期的受体完整性。萃取剂可以将受体包裹在去污剂胶束中，在4°C下储存长达1周，在-20°C下储存1个月时仍具有受体功能。在提取后如何稳定天然和功能形式的受体存在许多挑战，这使得在细胞膜外进行研究变得极为困难。这种提取试剂能够在1-2小时内从植物细胞或组织中有效提取功能受体。大多数功能性GPCR分析必须在提取受体后立即进行，随着时间的推移活性会迅速下降。本试剂盒提高了受体的稳定性，为研究人员提供了更大的样品灵活性。

本产品仅适用于科研实验，不可做他用。

产品组成：

有效期：

2-8℃保存，12个月有效，100×蛋白酶抑制剂E-20℃长期保存。

操作步骤（仅供参考）：

1）从不同样品类型中提取膜蛋白（植物组织）

1. 称取还原剂粉末0.5 mg，加入0.5 ml缓冲液，配置成1mg/ml还原剂的缓冲液（现配现用）。

2. 将植物组织用液氮研磨成粉末。称取粉末1g，加入0.5ml预冷的配置好的缓冲液重悬，并在冰上孵育20min（期间上下颠倒）。

3. 然后加入0.5ml 1×萃取剂（用稀释液将10×萃取剂稀释10倍到1×），上下混匀后在冰上萃取2小时。（为获得更好的萃取效果，在4°C下持续混匀）

4. 在4°C下以16,000×g离心20分钟。小心取出含有稳定蛋白受体的上清液，然后转移到新试管中。

5. 立即进行下游应用或将提取物等分试样储存，以备将来在4°C下使用长达1周或在-20°C下使用长达1个月，使受体功能损失最小。

2）从不同样品类型中提取膜蛋白（不含细胞质蛋白）

1. 将植物组织用液氮研磨成粉末。取1mg粉末，加入1×PBS重悬，4°C下以16,000×g离心20分钟。

2. 去掉上清，沉淀加入0.5ml的1mg/ml还原剂的缓冲液（现配现用，称取还原剂粉末0.5 mg，加入0.5 ml缓冲液，配置而成。），重悬，并在冰上孵育20min（期间上下颠倒）。

3. 然后加入0.5ml 1×萃取剂（用稀释液将10×萃取剂稀释10倍到1×），上下混匀后在冰上萃取2小时。（为获得更好的萃取效果，在4°C下持续混匀）

4.在4°C下以16,000×g离心20分钟。小心取出含有稳定蛋白受体的上清液，然后转移到新试管中。

5.立即进行下游应用或将提取物等分试样储存，以备将来在4°C下使用长达1周或在-20°C下使用长达1个月，使受体功能损失最小。

排除故障：

现象	可能的原因	建议操作
裂解液浓度过低。	组织太老	选取幼嫩组织
	研磨不充分	液氮研磨成细粉
	称取量不够	按比例称取材料（如果有0.5g材料，加入0.25ml缓冲液和0.25ml萃取液。
裂解液粘稠	提取缓冲液的体积太低	增加提取缓冲液的体积（将2 ml提取缓冲液用于2g植物材料）
受体产量低	细胞膜溶解性差	在加入缓冲液孵育之前，请使用充分研磨，或者加入缓冲液后再用组织匀浆器匀浆。
	细胞破碎过于激烈	请勿使用超声进行细胞破碎。改为使用液氮研磨或者Dounce匀浆器。

注意事项：

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅供科研使用，严禁它用。