土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性测定试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GLS(EC 3.5.1.2)存在于高等动物和某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
测定原理:
S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏试剂检测氨增加的速率,即可计算其酶活性。
试剂组成和配制:
产品名称
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SSQ039-100T/96S
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Storage
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试剂一:液体
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15ml
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4℃
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试剂二:液体
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40ml
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4℃
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试剂三:液体
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60ml
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常温
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试剂四:液体
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5ml
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常温
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试剂五:液体
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3ml
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常温
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试剂六:液体
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3ml
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常温避光
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说明书
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一份
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自备仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、甲苯、冰和双蒸水。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至420nm,蒸馏水调零。
2、样品测定(在EP管中加入下列试剂);
试剂名称(μl)
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测定管
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对照管
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样本
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0.1
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甲苯
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25
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25
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振荡混匀,室温放置15min
试剂一
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100
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100
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试剂二
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400
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400
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混匀,37℃水浴2 小时
试剂三
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525
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525
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混匀,8000 g,25℃离心10 min;取上清液,依次加入下列试剂
上清液
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130
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130
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试剂四
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30
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30
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试剂五
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20
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20
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试剂六
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20
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20
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混匀,室温静置15min,420nm处读取测定管和对照管吸光值,
计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。
注意事项:
试剂六如出现沉淀,静置后取上清使用。
酶活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 3.8488x+0.0057;x为标准品浓度(μmol/ml),y为吸光值A。
单位定义:每g土样每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS(nmol/min/g 土样)=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反总÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。
V反总:反应体系总体积:1.05ml;T:反应时间,2h=120min;W:样本质量,g; 1000,μmol到nmol换算系数。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 1.9244x+0.0057;x为标准品浓度(μmol/ml),y为吸光值A。
单位定义:每g土样每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS(nmol/min/g 土样)=(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反总÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W。
V反总:反应体系总体积:0.525ml;T:反应时间,2h=120min;W:样本质量,g; 1000,μmol到nmol换算系数。