蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）试剂盒说明书

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。

测定原理：

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。

组成：

试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；临用前每支加入1.2ml试剂二充分溶解待用，现配现用；

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰

样品测定的准备：

按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、加样表(在1.5ml棕色EP管中按下表依次加样）：

试剂名称（μl）	测定管	对照管
样本	10	10
试剂三	40
试剂一		40

混匀，30℃准确水浴30min后，95℃水浴10min

试剂四

50

50

95℃水浴5min左右，冷却至室温

蒸馏水

400

400

混匀，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中，540nm下测定各管

吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管需要设一个对照管。

SS-Ⅰ活性计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0012x - 0.0492；x为标准品浓度（μg/ml），y为ΔA。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W

V反总：反应体系总体积，0.05ml； V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0006x - 0.0492；x为标准品浓度（μg/ml），y为ΔA。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W

V反总：反应体系总体积，0.05ml； V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g。