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生化试剂支链淀粉检测试剂盒(微量法 100T/96S)

¥ 1600

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上海跃腾生物技术有限公司
产品详情


支链淀粉含量试剂盒

微量100T/96S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

链淀粉是具有高度分支的多糖,淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响,对于不同比例直、支链淀粉的淀粉的研究具有重要的意义。

测定原理:

利用80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,利用双波长比色法测定支链淀粉含量。

组成:

组分名称

SA018-100T/96S

Storage

试剂一:液体

100ml

4℃

试剂二:乙醚(自备)

100ml

4℃

试剂三:液体

100ml

4℃

试剂四:液体

2ml

4℃

试剂五:液体

300μl

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

酶标仪/可见分光光度计、水浴、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。

淀粉提取:

称取0.01~0.02g烘干样本(建议称取约0.01g)于研钵中研碎,加入1ml试剂一,充分匀浆后转移到EP管中,80℃水浴提取30min3000g25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1ml试剂二(乙醚)振荡5min3000g25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1ml试剂三充分溶解,90℃水浴10min,冷却后待测。

测定步骤:

分光光度计或酶标仪预热30min以上,蒸馏水调零。

测定管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL样本, 14uL试剂四,120uL蒸馏水,2uL试剂五,44uL蒸馏水,混匀,分别测定550743nm处吸光值,ΔA测定=A550-A743

空白管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL试剂三, 14uL试剂四,120uL蒸馏水,2uL试剂五,44uL蒸馏水,混匀,分别测定550743nm处吸光值,ΔA空白=A550-A743

支链淀粉含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y=0.1214x+0.0076x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按样本干重计算

支链淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2) =8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.02mlV2:加入提取液体积,1 mlCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g

b.96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y= 0.0607x+0.0076x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.0607 ÷(V1×Cpr)=16.47×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按样本干重计算

支链淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.0607÷(W×V1÷V2) =16.47×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.02mlV2:加入提取液体积,1 mlCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g

检测限为10mg/g干重或0.1mg/mgprot

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