乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒说明书

微量法100T/48S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

测定原理：

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD⁺还原生成NADH和H⁺，H⁺传递给PMS生成的PMSH₂还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。

组成：

试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加入0.6ml蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加6ml蒸馏水充分溶解。

显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（ml)：0.3（ml)：3（ml)：15（mg）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有4个棕色空瓶）

自备仪器和用品：

天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

样本处理：

1.组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取上清测定。

2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取上清测定。

3.血清：直接测定。

测定操作：

注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管

计算公式：

1. 按照蛋白含量计算

LA含量（μmol/mg prot）= △A样÷△A标×C标÷ Cpr

= 2×△A样÷△A标÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

LA含量（μmol/g 鲜重）= △A样÷△A标×C标÷ W

= 2×△A样÷△A标÷ W

3.按照细胞数量计算

LA含量（μmol/10⁴cell）= △A样÷△A标×C标÷ 细胞数量

= 2×△A样÷△A标÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

LA含量（μmol/ml）= △A样÷△A标×C标

= 2×△A样÷△A标

C标：标准品浓度，2mmol/L；W：样本质量，g/ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml

注意事项：

若吸光值超过2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

检出限为1.8μmol/L。