脲酶（Urease， UE）测定试剂盒说明书

分光光度法 50管/24样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。UE活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关，反应了氮素状况。

测定原理：

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH₃-N。

组成：

试剂一：粉剂×1瓶，临用前加入5ml蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂4℃保存；

试剂三A液：液体×1支，4℃保存；试剂三B液：液体×1瓶，4℃保存；临用前将A液倒入B液中混合，待用；用不完的试剂4℃保存一周；

自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml比色皿、研钵、冰、和蒸馏水。

样本的前处理：

1、、细胞或组织样品的制备：

或培养细胞：先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至578nm，蒸馏水调零。

2、酶促反应

混匀，放入37℃水浴1h后，10000g 25℃离心10min，取上清液。

2、将上清液稀释10倍（取0.1ml上清液，加入0.9ml蒸馏水）。

3、测氨量（在1ml比色皿中加入下列试剂）

充分混匀，室温放置20min

混匀，于578nm处，蒸馏水调零，读吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

UE活力计算:

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x0.0373；x为标准品浓度（μg/ml），y为吸光值A。

1、血清（浆）UE活力的计算:

单位的定义：每ml血清（浆）每分钟产生1μg NH₃-N定义为一个酶活力单位。

UE活力（μg/min/ml）＝(ΔA-0.0373)÷0.0915×10×V反总÷V样÷T=27.32×(ΔA -0.0373)

单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH₃-N定义为一个酶活力单位。

2、组织、或细胞中1μg NH₃-N活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH₃-N定义为一个酶活力单位。

UE活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373)÷0.0915×10×V反总÷(V样×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟产生1μg NH₃-N定义为一个酶活力单位。

UE活力（μg/min/g 鲜重）＝(ΔA-0.0373)÷0.0915×10×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W

（3）按或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个或细胞每分钟产生1μg NH₃-N定义为一个酶活力单位。

UE活力（μg/min/10⁴cell）＝(ΔA-0.0373)÷0.0915×10×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0546×ΔA

10：稀释倍数；T：反应时间，60min； V反总：反应体系总体积：0.3ml；V样：加入反应体系中样本体积，0.02ml；V样总：提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量， g；500：或细胞总数，500万。