酪氨酸解氨酶（Tyrosine ammonilyase，TAL）试剂盒说明书

微量法100T/48S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

TAL广泛存在于植物和微生物中，是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪氨酸转化为香豆酸，香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。

测定原理：

TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸，使反应溶液333nm下的吸光度随反应时间而上升，根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。

组成：

自备仪器和用品：

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水

粗酶液提取：

1、、细胞或组织样品的制备：

或培养细胞：先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）果汁等液体样品：直接检测。

测定操作表：

1、酶标仪预热30min以上，调节波长至333nm。

2、准备96孔UV板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。

3、试剂二的配置：临用前在试剂二瓶中加入10ml试剂一充分溶解待用（用不完的试剂4℃保存一周，注意现配现用），在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

4、在EP管中依次加入如下试剂

混匀，10000g 4℃离心5min，取200μl上清至96孔UV板，333nm下测定吸光值A测定与A对照，ΔA=A测定-A对照

TAL活性计算：

1、血清（浆）或果汁TAL活性

单位的定义：每分钟每ml血清（浆）或果汁在每ml反应体系中使333nm处吸光值变化

0.005为一个酶活力单位。

TAL（U/ml）=ΔA×V反总÷( V样÷V样总)÷0.005÷T =35×ΔA

2、组织、或细胞TAL活性

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每ml反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个

酶活力单位。

TAL（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

（2）按样本鲜重计算：

单位定义：每分钟每g组织在每ml反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个

酶活力单位。

TAL（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T =35×ΔA÷W

（3）按或细胞密度计算：

单位定义：每分钟每1万个或细胞在每ml反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。

TAL（U/10⁴cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T =0.07×ΔA

V反总：反应体系总体积，0.42ml；V样：加入样本体积，0.04ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，60 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或总数，500万。