羟自由基能力测定试剂盒说明书

分光光度法 50管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

测定原理：

H₂O₂/ Fe² 通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe² 水溶液中Fe² 氧化为Fe³ ，导致536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品羟自由基的能力。

组成：

自备仪器和用品：

恒温水浴锅、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿和蒸馏水。

样品的制备：

1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.血清、果汁等液体样品可直接测定。

3.提取物（或者）可配制成一定浓度，如5 mg/ml。

测定操作表

1、分光光度计预热30min，调节波长至536nm，蒸馏水调零。

2、工作液配制：使用之前按照每管试剂一：试剂二：试剂三=300:150:300（μl）的比例配制，用多少配多少，混匀。

3、在EP管中加入如下试剂

	空白管	对照管	测定管
工作液（μl）	750	750	750
混匀，防止局部颜色过浓
样品（μl）			150
试剂四（μl）		150	150
H2O（μl）	300	150
混匀、37℃保温60min，8000g 25℃离心5min，吸取1ml于1ml玻璃比色皿中测定536nm处吸光值，空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为A空、A对和A测。

注意：空白管和对照管只需测定一次。

计算公式

羟自由基率 D% =（A测-A对）÷（A空-A对）×

A空、A对、A测：空白管、对照管和测定管的吸光值。

注意事项

为了比较不同样品羟自由基能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者）配制成同样浓度。