羟自由基能力测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子,造成细胞结构和功能受损,进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基能力是样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
测定原理:
H2O2/ Fe2 通过Fenton反应产生羟自由基,将邻二氮菲- Fe2 水溶液中Fe2 氧化为Fe3 ,导致536nm吸光度下降,样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度,反映了样品羟自由基的能力。
组成:
产品名称 |
AO007-50T/48S |
Storage |
提取液 |
50ml |
4℃ |
试剂一:液体 |
16ml |
4℃避光 |
试剂二:液体 |
8ml |
4℃避光 |
试剂三:液体 |
16ml |
4℃ |
试剂四:液体 |
9ml |
4℃ |
说明书 |
一份 |
自备仪器和用品:
恒温水浴锅、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿和蒸馏水。
样品的制备:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.血清、果汁等液体样品可直接测定。
3.提取物(或者)可配制成一定浓度,如5 mg/ml。
测定操作表
1、分光光度计预热30min,调节波长至536nm,蒸馏水调零。
2、工作液配制:使用之前按照每管试剂一:试剂二:试剂三=300:150:300(μl)的比例配制,用多少配多少,混匀。
3、在EP管中加入如下试剂
空白管 |
对照管 |
测定管 |
|
工作液(μl) |
750 |
750 |
750 |
混匀,防止局部颜色过浓 |
|||
样品(μl) |
150 |
||
试剂四(μl) |
150 |
150 |
|
H2O(μl) |
300 |
150 |
|
混匀、37℃保温60min,8000g 25℃离心5min,吸取1ml于1ml玻璃比色皿中测定536nm处吸光值,空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为A空、A对和A测。 |
注意:空白管和对照管只需测定一次。
计算公式
羟自由基率 D% =(A测-A对)÷(A空-A对)×
A空、A对、A测:空白管、对照管和测定管的吸光值。
注意事项
为了比较不同样品羟自由基能力,对于同一批样品必须加入等量的样品,血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积,提取物(或者)配制成同样浓度。