植物花色苷含量试剂盒说明书

分光光度法 50管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素，属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中，使其呈现由红到紫等不同颜色，是植物主要的呈色物质。

测定原理：

采用pH示差法测定花色苷含量，当pH为1.0时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在530处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值。pH示差法减少了溶液pH和溶剂差异的影响，排除了其他非花色苷类物质对检测结果的干扰。

试剂的组成和配制：

需自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵和蒸馏水

按照烘干样品质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g烘干样品，加入1ml提取液），充分匀浆后转移到EP管中，提取液定容至1 ml，盖紧后4℃浸提24 h，8000 g，25℃离心10 min，取上清液待测。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上；试剂一和试剂二预热10min以上。

2、 取100 μl上清液和900 μl试剂一（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm和700nm处的吸光值，分别记为A1和A2。

3、取100 μl上清液和900 μl试剂二（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm和700nm处的吸光值，分别记为A3和A4。

4、计算△A=（A1-A2）-(A3-A4)。

注意事项：

如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积1ml不变，如50 μl上清液和950 μl试剂一（相当于稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如200 μl上清液和800 μl试剂一（相当于稀释5倍），使A1保持在0.1~1范围内，可提高检测灵敏度；同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。

花色苷含量计算：

花色苷含量（μg/g干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×10⁶]÷W=16.7×ΔA× F÷W

V：提取液体积，1×10^-3L，ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10⁴L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；M：花色苷的相对分子质量：449.2g/mol；F：稀释倍数；10⁶：1g=10⁶μg；W：样本干重：g。

ΔA线性范围为0.005-1。