Trap 染色试剂盒
产品简介:
酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP) 遍布各种组织,分布极为广泛,因为主要存在于细胞的溶酶体内,所以通常被当作溶酶体标志酶。而溶酶体外的酸性磷酸酶存在于胞质内和内质网。不同种类的动物体内所含的酸性磷酸酶也不同,酸性磷酸酶的适宜pH范围在4.5~5.5之间。白血病人脾脏和正常人肺泡巨噬细胞存在的的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase,TRAP)并不是释放入血液,而是在细胞滤泡中。血液中绝大多数的TRAP来源于破骨细胞,因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
BIOISCO抗酒石酸酸性磷酸酶染色液将萘酚AS-BI作为底物,在酸性pH条件下被酸性磷酸酶水解释放出萘酚和磷酸,萘酚可以偶联重氮盐从而生成定位于细胞质中的有色产物,如果细胞内的ACP有抗酒石酸的活性,则呈阳性反应。该染色液不仅可用于细胞涂片、新鲜血涂片,还可以用于石蜡切片、冰冻切片。
组成:
产品名称
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SS001-50ml+11ml+10ml
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Storage
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试剂(A): TRAP 固定液
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50 ml
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4 ℃ 避光
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试剂(B): TRAP
孵育液
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B1: AS-BI Buffer
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1 ml
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4 ℃ 避光
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B2: 显色液
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2×0.5 ml
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4 ℃ 避光
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B3: TRAP Buffer
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9 ml
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4℃ 避光
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临用前,将 B2 的显色液Ⅰ和显色液Ⅱ二支等比例混合均匀,再按B1:B2:B3=1:1:9 混合,即为 TRAP 孵育液,即配即用。
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试剂(C): 苏木素染色液
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10 ml
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4℃ 避光
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说明书
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一份
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储存条件:
4℃避光保存,6个月有效。
自备材料:
1、 恒温箱、蒸馏水。
2、 载玻片、推玻片。
光学显微镜。
操作步骤(仅供参考):
(一)血液、细胞涂片:
1、 推片:在载坡片上放置新鲜血液或骨髓涂片,于载玻片处将推玻片保持30度,置于细胞滴液或血液的正前方,往后稍微移动与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开,此时沿载玻片平面匀速平稳向前滑动直至铺满血膜为止。
2、 自然晾干后使用TRAP固定液固定。
3、 水洗,略微晾干(不易过分干燥)。
(二)冰冻切片:
1、 冰冻切片回温后放于水中浸泡。
2、 自然晾干后使用TRAP固定液固定。
3、 水洗,略微晾干(不易过分干燥)。
4、 切片放入TRAP孵育液,置于温箱,避光浸染,水洗。
(三)石蜡切片:
1、 石蜡切片脱蜡,重复此步骤一次。
2、 无水乙醇,90 %乙醇和70 %乙醇。
3、 水洗。
4、 自然晾干后使用TRAP固定液固定。
5、 水洗,略微晾干(不易过分干燥)。
染色结果:
阳性颗粒
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细胞核
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紫红色
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蓝色
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临床意义:
1、 毛细胞白血病的毛细胞ACP染色后呈现出中度阳性或强阳性,且酒石酸无法抑制,此时其他细胞均呈现极弱阳性或阴性。
原粒细胞对ACP反应不一,急性白血病幼单核细胞ACP染色呈现阳性,原淋巴细胞呈现弱阳性。
3、 T淋巴细胞ACP染色呈现阳性,颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈现阴性或颗粒细小的弱阳性。
4、 戈谢细胞呈现强阳性,尼曼-皮克细胞呈现阴性或弱阳性。
注意事项:
1、 TRAP孵育液非常容易失效,本法适合使用皮肤穿刺血涂片,处理晾干后的样本需及时染色。
2、 冰冻切片染色时,应当减少切片在室温下所暴露的时间。
3、 为避免酶的活性受到影响,实验所用样本应新鲜,取材后需立即处理。
4、 需在4 ℃冰箱内进行组织固定,固定时间不宜超过24 h,否则酶的活性会出现减弱或消失。
5、 组织在石蜡包埋时,温度不宜高于56℃。为防止酶活性减弱或消失。应使用熔点为52~54 ℃的石蜡进行浸蜡,浸蜡时间要短。
6、 应选用AR级以上的二甲苯以避免不纯的二甲苯导致的黑色沉淀。
7、 为了您的和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、 本产品仅供科研使用,严禁它用。