碘化丙啶 PI 染色液(50μg/ml,含 RNase)

简介：

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链 DNA 和 RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶与双链 DNA 结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链 DNA 的含量成正比。细胞内的 DNA 被 Propidium Iodide 染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行 DNA 含量测定，然后根据 DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。碘化丙啶染色后，假设 G0/G1 期细胞的荧光强度为 1，那么含有双份基因组 DNA 的 G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为 2，正在进行 DNA 复制的 S 期细胞的荧光强度为 1～ 2 之间。碘化丙啶 PI 染色液(50μg/ml,含 RNase)主要由 PI、破膜剂、RNase 等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测， 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。

组成：

保存条件：

-20℃避光保存，一年有效。

操作步骤(仅供参考)：

1、细胞样品的制备：

⑴贴壁细胞：

①收集上述细胞悬液到离心管内。

②4℃，1000g 离心，使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃，可留大约 50μl 培养液，以免吸走细胞。

③加入约 1ml 提前预冷的 PBS，重悬细胞，并转移至 1.5ml 无菌离心管。

④4℃ 离心，使细胞沉到管底。

⑤小心吸取上清并丢弃，可留大约 50μl PBS，以免吸走细胞。

⑥轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

⑵悬浮细胞：

①4℃离心，使细胞沉到管底。

②小心吸取上清并丢弃，可留大约 50μl 培养液，以免吸走细胞。

③加入约 1ml 提前预冷的 PBS，重悬细胞，并转移至 1.5ml 无菌离心管。

④4℃离心，使细胞沉到管底。

⑤小心吸取上清并丢弃，可留大约 50μl PBS，以免吸走细胞。

⑥轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

2、细胞的固定：加入 1ml 冰浴预冷 70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定 2h 或更长时间。4℃固

定 12～24h 可能效果更佳。

3、细胞的清洗：

①4℃ 离心，使细胞沉到管底。

②小心吸取上清并丢弃，可留大约 50μl 溶液，以免吸走细胞。

③加入约 1ml 提前预冷的 PBS，重悬细胞，并转移至 1.5ml 无菌离心管。

④4℃ 离心，使细胞沉到管底。

⑤小心吸取上清并丢弃，可留大约 50μl PBS，以免吸走细胞。

⑥轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

4、PI 染色：在每个待检细胞样品中加入 500μl 配制好的 PI 染色工作液，轻轻重悬细胞沉淀，置于 37℃

避光水浴。

5、检测与分析：用流式细胞仪在激发波长 488nm 波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适

当分析软件进行细胞 DNA 或 RNA 含量分析和光散射分析。

注意事项：

1、 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。

2、 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

3、 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当

提高离心力或延长离心时间。

4、 如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化后，制备成单细胞悬液

5、 PI 对人体有一定刺激性，请注意适当防护。