支原体染色液（Dienes染色液）

简介：

支原体染色液（Dienes染色液）是一种经典的利用天青美蓝染色检测支原体污染的试剂，经常用于支原体的培养鉴定试验，支原体菌落被染成蓝色，L型细菌菌落在短时间内能染上蓝色，但经15～30 min后，由于细菌的新陈代谢作用把美蓝还原成无色，而支原体则长时间保持其染色。该试剂检测细胞含量范围一般为0.1～1×10⁶之间。

组成：

保存条件：

4℃避光保存，一年有效。

操作步骤(仅供参考)：

(一)贴壁细胞

1、 取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌于PBS或生理盐水洗涤3次，再用细胞培养液洗涤1次。将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为50%～80%。

2、加入Dienes染色液覆盖表面，孵育。

3、弃染色液，PBS或生理盐水洗2次，每次3 min，吸尽液体。

4、显微镜下观察。

(二)悬浮细胞

1、 低速离心离心后吸去大部分液体保留约液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。

2、 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。

3、 加入Dienes染色液覆盖表面，孵育。

4、 弃染色液，PBS或生理盐水洗2次，每次3 min，吸尽液体。

5、 显微镜下观察。

注意事项：

1、 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当提高离心力或延长离心时间。

2、 为了您的和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。