改良 Harris 苏木素染色液

简介：

苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE 染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA 的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA 双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

BIOISCO 改良Harris 苏木素染色液是最经典的Harris 苏木素染色法的改进。该染色液不含汞，无毒，无氧化膜，细胞核染色质着色深而细微，临床上常替代Harris 苏木素染色液。其特点是苏木素被氧化的程度高，染色力强，虽然染色时间短，但是易使细胞核、细胞质、纤维过染，染色后需要盐酸乙醇分化，属于退行性染色。

染色原理：

1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA 双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA 双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH 值密切相关。当染色液pH 值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中 离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE 染色中常用 1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用 1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核 呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

组成：

保存条件：

常温避光保存，一年有效。

自备材料：

1、盐酸乙醇分化液

2、蓝化液，如稀氨水、碳酸锂溶液等

3、系列乙醇

4、伊红染色液

5、4%多聚甲醛

操作步骤(仅供参考)：

（一）石蜡切片染色

1、切片脱蜡至水

①二甲苯作用。

②(可选)无水乙醇作用。

③95%的乙醇

④90%的乙醇

⑤80%的乙醇

⑥自来水或蒸馏水冲洗

2、染色

①Delafield 苏木素染色液染色

②自来水或蒸馏水冲洗

③(可选)盐酸乙醇分化

④自来水冲洗

⑤(可选)蓝化液返蓝

⑥自来水冲洗

⑦伊红染色液染色

⑧自来水冲洗

3、脱水、透明、封固

①80%乙醇

②90%乙醇

③95%乙醇作用。

④无水乙醇作用。

⑤二甲苯透明。

⑥中性树脂封片。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

(二)细胞染色

1、多聚甲醛固定。

2、自来水冲洗。

3、蒸馏水冲洗。

4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

注意事项：

1、切片脱蜡应尽量干净。

2、系列乙醇应经常更换新液。

3、盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时 间应该足够，以便彻底清洗酸。

4、乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和 95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，密闭保存。

5、冷冻切片染色时间尽量要短。

6、蓝化液常使用 0.2～1%氨水或Scott 促蓝液或 0.1～1%碳酸锂溶液。

7、为了您的和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

8、本产品仅供科研使用，严禁它用。