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片段分选磁珠 NGSbead/NGS磁珠/二代测序磁珠试剂盒

¥ 1920

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  • 10000盒 总供应
  • 江苏 苏州 所在地
苏州北科纳米科技有限公司
产品详情

NGSbead磁珠专为二代测序建库时DNA的选择性或非选择性回收,以及PCR产物的纯化回收而设计。该片段分选试剂盒适用于高通量测序文库(NGS)构建中DNA 片段大小快速分选和回收。 NGSbead直接分散在结合缓冲液中,调整磁珠悬浮液和样品的体积比,可以选择左侧、右侧或双侧尺寸的DNA 片段。纯化后的片段不含核苷酸、引物二聚体、接头、酶和盐等污染物。 NGSbead为新一代测序工作流程提供了高效的基于磁珠的净化系统,是专门为配套自动化工作台开发的大规模、高通量的片段分选试剂盒,可以适用于几乎所有自动化仪器,也可人工进行少量样品的片段分离。


产品性能
洗脱得到的DNA纯度高,A260/A280的比值在 1.7-1.9之间, A260/A230的比值通常在2.0以上。磁珠回收率高, 500bp以上回收90%,200bp以上回收80%,100bp以上回收70%。


应用方向
? 高通量测序文库(NGS)构建中DNA 片段大小快速分选和回收;
? 可以选择左侧、右侧或双侧尺寸的DNA 片段;
? 1.8倍体积悬浮液结合后,洗涤,洗脱,可用于PCR、酶反应产物的纯化。


注意事项
1、 磁珠保存在去离子水中,冷冻、干燥和离心可能会影响磁珠的使用效果;
2、 磁珠由于重力作用而沉降属正常现象,使用前,务必充分振荡混匀磁珠;


使用方法
试剂组成

NGSbead:使用前涡旋20秒,使其彻底混匀。
Wash buffer: 80%乙醇(现配现用,4℃保存时间不超过7天);
Elution buffer: 10 mM Tris-HCl(PH 8.0)或去离子水;


一、 第一次磁珠分选(去除不需要的大片段DNA)
1. NGSbead磁珠室温放置30 min,涡旋混匀至磁珠悬液颜色均一。参考表1,向反应液中加入适量的磁珠溶液,吹打至少10 次以混匀混合液,室温静置5 min。

表1 磁珠悬液与样本体积比例表(表中磁珠用量是相对余样本体积)

2. 将96 孔板放在磁力架上分离磁珠,静置至少5 min,直至上清完全澄清。
3. 转移上清至新96 孔板中,丢弃结合有大片段DNA 的磁珠。(注意:不要丢弃上清)


二、 第二次磁珠分选(去除不需要的小片段DNA)
1. 涡旋重悬混匀 NGSbead磁珠至颜色均一,将磁珠溶液加入上述上清中(参考表1),吹打至少10 次以混匀,室温静置5 min。
2. 将96 孔板放在磁力架上分离磁珠,静置至少5 min,直至上清完全澄清。
3. 小心移弃含有不需要DNA 的上清。(注意:不要丢弃磁珠)


三、 乙醇清洗
1. 乙醇清洗步骤中,需要将96 孔板放在磁力架上,在清洗过程中勿碰触磁珠。加入200 μL 的80%乙醇,室温静置至少30 s,移弃上清。重复该步骤一次。


四、 洗脱
1. 将96 孔板放在磁力架上,室温静置5 min,挥发残留的乙醇。(注意:干燥至管底无明显液滴;勿过度干燥磁珠,防止DNA 回收效率过低)。
2. 从磁力架上移走96 孔板,加入10-50 μL 的Elution buffer重悬吹打或振荡混匀磁珠,室温放置2-5 min。(Elution buffer在65-70℃中预热后洗脱效果更好)
3. 将96 孔板放置在磁力架上。溶液澄清后,转移上清至新的96 孔板中。

注意:1. 提供的操作步骤是去除小片段和大片段,获得中间范围内片段的过程。若实验目的是去掉小片段回收大片段或去掉大片段回收小片段,仅需选择合适的磁珠溶液比例操作即可。 2. 该试剂盒磁珠溶液可用于300 bp~800 bp 片段的回收。 3. 由于回收获得的片段的大小与磁珠溶液和样品比例有关,加样量的准确性十分重要,且样品体积尽量不要太小,减少加样误差,一般在50 μL~150 μL 范围。

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