苏州凯发新材料科技有限公司
■应用方向
? 高通量测序文库（NGS）构建中DNA 片段大小快速分选和回收；
? 可以选择左侧、右侧或双侧尺寸的DNA 片段；
? 1.8倍体积悬浮液结合后，洗涤，洗脱，可用于PCR、酶反应产物的纯化。
NGSbead：使用前涡旋20秒，使其彻底混匀。
Wash buffer: 80%乙醇（现配现用，4℃保存时间不超过7天）；
Elution buffer: 10 mM Tris-HCl（PH 8.0）或去离子水；
表1 磁珠悬液与样本体积比例表（表中磁珠用量是相对余样本体积）
2. 将96 孔板放在磁力架上分离磁珠，静置至少5 min，直至上清完全澄清。
二、 第二次磁珠分选（去除不需要的小片段DNA）
1. 涡旋重悬混匀 NGSbead磁珠至颜色均一，将磁珠溶液加入上述上清中（参考表1），吹打至少10 次以混匀，室温静置5 min。
2. 将96 孔板放在磁力架上分离磁珠，静置至少5 min，直至上清完全澄清。
3. 小心移弃含有不需要DNA 的上清。（注意：不要丢弃磁珠）
二、 第二次磁珠分选（去除不需要的小片段DNA）
1. 涡旋重悬混匀 NGSbead磁珠至颜色均一，将磁珠溶液加入上述上清中（参考表1），吹打至少10 次以混匀，室温静置5 min。
2. 将96 孔板放在磁力架上分离磁珠，静置至少5 min，直至上清完全澄清。
3. 小心移弃含有不需要DNA 的上清。（注意：不要丢弃磁珠）
四、 洗脱
1. 将96 孔板放在磁力架上，室温静置5 min，挥发残留的乙醇。（注意：干燥至管底无明显液滴；勿过度干燥磁珠，防止DNA 回收效率过低）。
2. 从磁力架上移走96 孔板，加入10-50 μL 的Elution buffer重悬吹打或振荡混匀磁珠，室温放置2-5 min。（Elution buffer在65-70℃中预热后洗脱效果更好）
3. 将96 孔板放置在磁力架上。溶液澄清后，转移上清至新的96 孔板中。
注意：1. 提供的操作步骤是去除小片段和大片段，获得中间范围内片段的过程。若实验目的是去掉小片段回收大片段或去掉大片段回收小片段，仅需选择合适的磁珠溶液比例操作即可。 2. 该试剂盒磁珠溶液可用于300 bp~800 bp 片段的回收。 3. 由于回收获得的片段的大小与磁珠溶液和样品比例有关，加样量的准确性十分重要，且样品体积尽量不要太小，减少加样误差，一般在50 μL~150 μL 范围。
