本试剂盒是用来从叶子、种子等植物组织和植物培养细胞等植物样品中快速提取和纯化植物基因组DNA。本试剂盒是利用磁硅珠能吸附破碎溶液中的基因组DNA的原理来回收DNA。无需借助苯酚等有害的试剂来进行除蛋白操作,就能简便地抽提出基因组DNA。回收的DNA可以直接用于下游进行酶切、PCR、二代测序和基因芯片等分子生物学实验。本试剂盒除可与核酸自动抽提装置组合使用外,还可与磁分离架一起使用,作为进行固液手动分离的试剂盒。
【特点】
l 简便/短时间:利用磁硅珠对基因组DNA的吸附性,能简便地在短时间内抽提出基因组DNA。
1) 裂解液低温储存可能会出现白色絮状漂浮物,在使用前65℃预热至白色絮状物完全溶解,不影响使用效果。
3)如果下游实验对RNA污染比较敏感,可在裂解时加入1ul 的RNaseA (10mg/ml)。
5)如果同等取样量下欲得到更多DNA可增加洗脱次数(洗脱次数最好不要超过3次),也可适当延长裂解时间。
【试剂盒组成】
取材量参考下面表格:
1)取新鲜植物组织或粉状干燥组织50mg~200mg,用液氮在研钵中研磨充分,加入1ml的Lysis Buffer(65℃预热)研磨均匀,然后转移到1.5ml的EP管,混合均匀。
3)取200ul上清液于新的1.5ml的EP管中,加入20ul 的RNA酶混匀,5min后加入20ul的 bead、200ul异丙醇,颠倒混匀静置5min后,将EP管置于磁力架上磁分离,吸弃上清液。
5)移去磁力架,加入100ul的Elution Buffer,移液枪缓慢吹打混匀1~2min,将离心管在磁力架上静置0.5min,小心吸走上清液放入新离心管即为提取的DNA,存放于2-8℃,长期存放需置于-20℃。(洗脱液在65-70 ℃中预热后洗脱效果更好,减小洗脱体积或多次洗脱可增大DNA浓度。)
【常见问题即处理建议】
常见问题 |
可能的原因 |
建议 |
得率 |
样品没有研磨充分 |
尽量将样品研磨充分 |
样品裂解完后,没有离心直接进行下一步操作 |
如样品裂解后,一定要离心后,再进行下一步操作。 |
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样品用量过大 |
严格按说明书程序进行 |
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程序设置不准确 |
严格按说明书程序进行 |
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条带弥散 |
研磨时间太长 |
迅速研磨防止DNA降解 |
环境温度太高 |
可将研钵置于-20℃预冷20min后再进行研磨,如所提材料基因组极易降解,用液氮研磨 |
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样品不新鲜或样品反复冻融多次 |
尽量用新鲜样品试验 |
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裂解时间太长 |
裂解时间不超过60min |