苏州凯发新材料科技有限公司
01/产品介绍
游离DNA又称游离循环核酸，指循环血液中游离于细胞外的DNA，这类DNA片段大小通
常不超过800Bp，主要存在于血清及血浆中。游离DNA片段在疾病的早期诊断、预后、监
测等方面具有重要潜在价值。本试剂盒专为提取游离DNA而设计，基于硅基磁珠特异性吸
附DNA的原理，在各种提取组分中实现除杂和富集，得到纯净高质量游离DNA分子，适
用于PCR反应，qPCR检测，二代测序（NGS）等下游分子操作。
02/产品优势
1. 普适性强，适用于新鲜或冷冻抗凝血清、血浆及无细胞体液样本提取
2. 性能稳定，提取过程无毒
3. 质量高，纯度好
04/保存条件
室温保存1年有效。
05/自备试剂
异丙醇，无水乙醇
06/注意事项
1． 初次使用前，请向BufferCW1和BufferCW2中加入相应体积的无水乙醇。
2． 每次使用前摇匀各瓶中溶液，使体系均一，保证提取效果。
3． 样品应避免反复冻融（一般不超过3次），否则会降低提取质量。
4． 样品短期可4℃保存一周，-80℃长期保存。
5． 溶液放置一段时间后若产生沉淀，可37℃水浴溶解，不影响效果。
6． 使用无菌离心管和枪头，避免外源核酸酶污染。
07/使用方法
1.取600ul样品于1.5ml洁净离心管中。
2.向其中加入400ul Buffer KD和20ul Proteinase K，漩涡混匀30s。
3.68℃孵育（水浴和金属浴均可）10min，每间隔2-3min漩涡混匀5s。
4.加入200ul异丙醇漩涡混匀20s，加入20ul磁珠悬液（注意：加入前漩涡混匀磁珠悬液）。
5.漩涡混匀30smin，静置1min。
6.重复操作步骤5两次。
7.转移离心管置于磁力架上，进行磁分离后，小心吸去液体（注意：不要吸走磁珠）。
8.从磁力架上取下离心管，加入800ulBufferCW1，漩涡混匀2min，进行磁分离，吸去除
磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。
9.重复操作步骤8一次。
10.从磁力架上取下离心管，加入600ulBufferCW2，漩涡混匀2min，进行磁分离，吸去除
磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。
11.重复操作步骤10一次。
12.转移离心管于磁力架上，室温晾干8-10min（注意：晾干时间不可超过10min，否则会
影响基因组质量）。
13.取下离心管，加入80-150ulBufferCTE，用移液枪吹吸混匀20次，65℃孵育8min，期
间吹吸混匀2次。
14.转移离心管置于磁力架上，进行磁分离，转移除磁珠以外的液体于一新的离心管中，
-20℃保存。
08/常见问题及应对策略
◆获得的基因组DNA纯度低
1.建议增加BufferCW1和BufferCW2洗脱用量100ul。
2.选用新鲜样本进行提取。
3.洗涤过程中，磁珠未被充分打散，有蛋白聚集，建议增加吹吸或漩涡混匀的力度和时间。
4.用BufferCTE洗脱前未充分晾干，有少量乙醇残留。
◆获得的基因组DNA浓度低
1.建议更换新鲜的样本进行提取。
2.减少BufferCTE的用量，或延长65℃孵育时间至15min。
3.洗脱过程中，磁珠未充分磁分离就转移液体，造成磁珠损失。
4.加大磁珠5-10ul，以增加吸附力度，从而增大得率。
5.晾干时间超过10min，磁珠太过于干燥，洗脱效率下降。
6.用BufferTE洗脱过程中未充分打散磁珠团块，造成基因组释放不充分。
◆提取过程中出现磁珠结团现象
在磁珠法提取过程中，由于大量染色质核酸吸附在磁珠表面，绝大多数情况下会出现磁珠结
团的现象。此现象可作为核酸含量的判别指标，一般来说，有结团说明样本良好，吸附过程
顺利高效，只要操作者在洗涤和洗脱过程中，充分打散团块就可得到理想的基因组DNA分
子。
