介绍

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS）病毒抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的PRRS抗体，评估养猪场PRRS疫苗免疫状况及感染猪的血清学辅助诊断。本试剂盒对经典蓝耳病病毒和高致病性蓝耳病病毒所产生的抗体都有很好的敏感性。

本试剂盒采用间接ELISA法，在酶标板条微孔上预包被纯化的PRRS病毒抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有PRRS病毒特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物液，经酶催化形成蓝色产物，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

组份

1	抗原预包被板条	1/2块	7	阴性对照	0.8/1.6ml
2	酶结合物	11/21ml	8	阳性对照	0.8/1.6ml
3	10倍浓缩洗涤液	50/100ml	9	血清稀释板	1/2块
4	显色液	11/22ml	10	封板膜	2/4张
5	样本稀释液	50/100ml	11	说明书	1份
6	终止液	6/11ml

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

样品的稀释

在血清稀释板中按1：50的体积比稀释待检血清。

注意：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。

3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。

4. TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8. 血清稀释板为一次性用品，不得重复使用；血清稀释板的MAX容量为300μl/孔。

操作步骤

1. 取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照1孔，阳性对照2孔，取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中，轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。

2. 盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育30分钟。

3. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，然后在干净吸水纸上拍干。

4. 每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

5. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤4-6次, 方法同3。切记之后在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔加显色液100μl，轻微震荡混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

7. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

试验成立的条件是：

阴性对照（N）OD值0.2，同时阳性对照（P）OD值0.5；

计算方法：

（样品OD值-阴性OD均值）÷（阳性对照OD均值-阴性OD均值）= IRPC值

阴阳性判断：

IRPC≥0.4则判断为阳性，否则判为阴性。

贮存方法： 2 - 8oC下贮存。

有效期： 12个月。