介绍
猪瘟(classical swine fever,CSF)抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的猪瘟抗体,评估猪场猪瘟疫苗免疫状况。
本试剂盒采用阻断ELISA法,在酶标板条微孔上预包被猪瘟抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有猪瘟抗原特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标的抗猪瘟抗体,样本中的抗体阻断了酶标抗体与包被板上抗原的结合;经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入TMB底物液,经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
组份
1 |
抗原预包被板条 |
1/2块 |
6 |
终止液 |
6/11ml |
2 |
酶结合物 |
11/22ml |
7 |
阴性对照 |
1/2ml |
3 |
10倍浓缩洗涤液 |
50/100ml |
8 |
阳性对照 |
0.5ml/1ml |
4 |
显色液 |
11/22ml |
9 |
封板膜 |
2/4张 |
5 |
样本稀释液 |
100ml |
10 |
说明书 |
1份 |
需自备的设备及试剂
1.微量移液器:10μl-100μl、100μl-1000μl。
2.一次性移液器吸头。
3.量筒:500ml。
4.96孔板酶标仪。
5.蒸馏水或去离子水。
6.洗瓶或洗板机。
样品制备
取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
注意事项
1.试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。
2.不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
3.终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
4.TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5.检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。
6.所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7. 严格遵守操作说明可以获得好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
8.抗原包被板为一次性用品,不得重复使用;
操作步骤
1.每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔,阴、阳性对照不用稀释,直接取100ul加入反应孔。
2.将样品稀释液按80ul/孔加入到微孔反应板内,之后将待检样品血清按20ul/孔加入孔内并吹打混匀(移液器枪头请勿混用);
3.盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育60分钟。
4. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,然后在干净吸水纸上拍干。
5.每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
6.小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤4-6次, 方法同4。切记之后要在干净吸水纸上拍干。
7.每孔加显色液100μl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色
15分钟。
1.每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。
结果判定
用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度OD值。
试验成立的条件是:
阴性对照(N)OD值0.5,同时阳性对照(P)阻断率50%;
计算方法:
PI (阻断率)= 1 —(样品OD值 ÷ 阴性OD均值)
阴阳性判断:
当PI(阻断率)40%则判断为阳性;
当PI=40%且PI30%为可疑;
当PI=30%则判断为阴性。
贮存方法:2 - 8oC下贮存。
有效期: 12个月。