上海跃腾生物技术有限公司
SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
简介：
聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis， SDS-PAGE)，其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。
SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE 凝胶，也可配制非变性(native)PAGE 凝胶，具体配制的量应根据器具大小决定。
组成：
产品名称 |
PE017-30T |
PE017-150T |
Storage |
试剂(A):30% Acr-Bis (29:1) |
100ml |
500ml |
4℃避光 |
试剂(B):1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
100ml |
500ml |
RT |
试剂(C):1.5M Tris-HCl(Ph6.8) |
30ml |
150ml |
RT |
试剂(D):10% SDS |
5ml |
25ml |
RT |
试剂(E):Ammonium persulfate (过硫酸铵) |
0.5g |
2.5g |
RT |
试剂(F):TEMED |
1ml |
5ml |
4℃避光 |
说明书 |
一份 |
||
保存条件：。
常温保存，一年有效。
操作步骤(仅供参考)：
1、配制 10%过硫酸铵：直接在Ammonium Persulfate 中加入蒸馏水，充分溶解，分装 成小份储存于-20℃或 4℃。
注意：一般用 1.5mlEP 管分装成 0.5-1ml 每支，-20 ℃ 保存，每支使用 2-3 次即弃用。短期使用时，可保存于 4℃，1周有效。
2、根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照下表配制分离胶(下层胶)：
不同浓度的SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE 分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
6%胶 |
50-150kD |
8%胶 |
30-90kD |
10%胶 |
20-80kD |
12%胶 |
12-60kD |
15%胶 |
10-40kD |
成分 |
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
6%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
2.7 |
5.4 |
8.1 |
10.8 |
16.2 |
27 |
30% Acr-Bis (29:1) |
1.0 |
2.0 |
3.0 |
4.0 |
5.0 |
6.0 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
3.75 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.004 |
0.008 |
0.012 |
0.016 |
0.024 |
0.04 |
成分 |
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
8%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
2.4 |
4.7 |
7.1 |
9.5 |
14.2 |
23.7 |
30% Acr-Bis (29:1) |
1.3 |
2.7 |
4.0 |
5.3 |
8.0 |
13.3 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
3.75 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.003 |
0.006 |
0.009 |
0.012 |
0.018 |
0.03 |
成分 |
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
10%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
2.0 |
4.1 |
6.1 |
8.1 |
12.2 |
20.3 |
30% Acr-Bis (29:1) |
1.7 |
3.3 |
5.0 |
6.7 |
10.0 |
16.7 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
3.75 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.012 |
0.02 |
成分 |
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
12%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
1.7 |
3.4 |
5.1 |
6.8 |
10.2 |
17 |
30% Acr-Bis (29:1) |
2.0 |
4.0 |
6.0 |
8.0 |
12.0 |
20.0 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
3.75 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.012 |
0.02 |
成分 |
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
15%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
1.2 |
2.4 |
3.6 |
4.8 |
7.2 |
12.0 |
30% Acr-Bis (29:1) |
2.5 |
5.0 |
7.5 |
10.0 |
15.0 |
25 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
3.75 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.012 |
0.02 |
按照如下表格配制SDS-PAGE 的浓缩胶（也称堆积胶/积层胶或上层胶）：
成分 |
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
||||||
5%胶 |
1 |
2 |
3 |
4 |
6 |
8 |
10 |
蒸馏水 |
0.68 |
1.4 |
2.1 |
2.7 |
4.1 |
5.5 |
6.8 |
30% Acr-Bis (29:1) |
0.17 |
0.33 |
0.5 |
0.67 |
1.0 |
1.3 |
1.7 |
1.5M Tris-HCl(pH6.8) |
0.13 |
0.25 |
0.38 |
0.5 |
0.75 |
1.0 |
1.25 |
10% SDS |
0.01 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.06 |
0.08 |
0.1 |
10%过硫酸铵 |
0.01 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.06 |
0.08 |
0.1 |
TEMED |
0.001 |
0.002 |
0.003 |
0.004 |
0.006 |
0.080 |
0.01 |
注意事项：
1、过硫酸铵配制成 10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。有效 避免失效的方法是分成小份，-20℃保存，用 2~3 次，剩余的弃用，亦可 4℃保存几天。
2、TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切， 可 通过适当调节TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固。
4、30%Acr-Bis(29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6、本产品仅供科研使用，严禁它用。
