上海跃腾生物技术有限公司
SDS-PAGE 凝胶快速配制试剂盒
简介：
聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis， SDS-PAGE)，其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)；非变性聚丙烯酰胺凝胶蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。
SDS-PAGE 凝胶快速配制试剂盒把所需的缓冲液、SDS 等预混于下层胶缓冲液(4×)(用于配制分离胶)和上层胶缓冲液(4×)(用于配制浓缩胶)，分别含有Tris- HCl(pH8.8)、SDS 和Tris-HCl(pH6.8)、SDS，具体配制的量应根据器具大小决定。
组成：
产品名称
|
PE016-30T
|
PE016-150T
|
Storage
|
试剂(A):30% Acr-Bis (29:1)
|
100ml
|
500ml
|
4℃避光
|
试剂(B):下层胶缓冲液(4X)
|
70ml
|
350ml
|
RT
|
试剂(C):上层胶缓冲液(4X)
|
30ml
|
150ml
|
RT
|
试剂(D):Ammonium persulfate (过硫酸铵)
|
0.5g
|
2.5g
|
RT
|
试剂(E):TEMED
|
1ml
|
5ml
|
4℃避光
|
说明书
|
一份
|
||
保存条件：。
常温保存，一年有效。
操作步骤(仅供参考)：
1、配制 10%过硫酸铵：直接在Ammonium Persulfate 中加入蒸馏水，充分溶解，分装 成小份储存于-20℃或 4℃。注意：一般用 1.5mlEP 管分装成 0.5-1ml 每支，-20 ℃ 保存，每支使用 2-3 次即弃用。短期使用时，可保存于 4℃，1 周有效。
2、根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照下表配制分离胶(下层胶)：
不同浓度的SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE 分离胶浓度
|
最佳分离范围
|
6%胶
|
50-150kD
|
8%胶
|
30-90kD
|
10%胶
|
20-80kD
|
12%胶
|
12-60kD
|
15%胶
|
10-40kD
|
成分
|
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml）
|
|||||
6%胶
|
5
|
10
|
15
|
20
|
30
|
50
|
蒸馏水
|
2.7
|
5.4
|
8.1
|
10.8
|
16.2
|
27
|
30% Acr-Bis (29:1)
|
1.0
|
2.0
|
3.0
|
4.0
|
5.0
|
6.0
|
1.5M Tris-HCl(pH8.8)
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5.0
|
7.5
|
12.5
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
TEMED
|
0.004
|
0.008
|
0.012
|
0.016
|
0.024
|
0.04
|
成分
|
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml）
|
|||||
8%胶
|
5
|
10
|
15
|
20
|
30
|
50
|
蒸馏水
|
2.4
|
4.7
|
7.1
|
9.5
|
14.2
|
23.7
|
30% Acr-Bis (29:1)
|
1.3
|
2.7
|
4.0
|
5.3
|
8.0
|
13.3
|
1.5M Tris-HCl(pH8.8)
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5.0
|
7.5
|
12.5
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
0.018
|
0.03
|
成分
|
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml）
|
|||||
10%胶
|
5
|
10
|
15
|
20
|
30
|
50
|
蒸馏水
|
2.0
|
4.1
|
6.1
|
8.1
|
12.2
|
20.3
|
30% Acr-Bis (29:1)
|
1.7
|
3.3
|
5.0
|
6.7
|
10.0
|
16.7
|
1.5M Tris-HCl(pH8.8)
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5.0
|
7.5
|
12.5
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.008
|
0.012
|
0.02
|
成分
|
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml）
|
|||||
12%胶
|
5
|
10
|
15
|
20
|
30
|
50
|
蒸馏水
|
1.7
|
3.4
|
5.1
|
6.8
|
10.2
|
17
|
30% Acr-Bis (29:1)
|
2.0
|
4.0
|
6.0
|
8.0
|
12.0
|
20.0
|
1.5M Tris-HCl(pH8.8)
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5.0
|
7.5
|
12.5
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.008
|
0.012
|
0.02
|
成分
|
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml）
|
|||||
15%胶
|
5
|
10
|
15
|
20
|
30
|
50
|
蒸馏水
|
1.2
|
2.4
|
3.6
|
4.8
|
7.2
|
12.0
|
30% Acr-Bis (29:1)
|
2.5
|
5.0
|
7.5
|
10.0
|
15.0
|
25
|
1.5M Tris-HCl(pH8.8)
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5.0
|
7.5
|
12.5
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.3
|
0.5
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.008
|
0.012
|
0.02
|
按照如下表格配制SDS-PAGE 的浓缩胶（也称堆积胶/积层胶或上层胶）：
成分
|
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml）
|
||||||
5%胶
|
1
|
2
|
3
|
4
|
6
|
8
|
10
|
蒸馏水
|
0.68
|
1.4
|
2.1
|
2.7
|
4.1
|
5.5
|
6.8
|
30% Acr-Bis (29:1)
|
0.17
|
0.33
|
0.5
|
0.67
|
1.0
|
1.3
|
1.7
|
1.5M Tris-HCl(pH6.8)
|
0.13
|
0.25
|
0.38
|
0.5
|
0.75
|
1.0
|
1.25
|
10% SDS
|
0.01
|
0.02
|
0.03
|
0.04
|
0.06
|
0.08
|
0.1
|
10%过硫酸铵
|
0.01
|
0.02
|
0.03
|
0.04
|
0.06
|
0.08
|
0.1
|
TEMED
|
0.001
|
0.002
|
0.003
|
0.004
|
0.006
|
0.080
|
0.01
|
注意事项：
1、过硫酸铵配制成 10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。有效 避免失效的方法是分成小份，-20℃保存，用 2~3 次，剩余的弃用，亦可 4℃保存几天。
2、TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固。
4、30%Acr-Bis(29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。
5、为了您的和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6、本产品仅供科研使用，严禁它用。
