上海跃腾生物技术有限公司
SDS-PAGE 浓缩胶缓冲液(4×)
简介：
本试剂为配制 SDS-PAGE 浓缩胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE 凝胶，方便、快捷。
组成：
产品名称 |
PE015-100ml |
PE015-500ml |
Storage |
SDS-PAGE 浓缩胶缓冲液(4×) |
100ml |
500ml |
4℃ |
说明书 |
一份 |
||
保存条件：
4℃ ，三个月有效。
自备材料：
1、凝胶模具
2、Acr-Bis(30%,29:1)
3、10%APS(过硫酸铵)
4、TEMED
5、10%SDS
6、10%SDS
操作步骤(仅供参考)：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表 1。
(一)灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表 2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。(注：加入上层筛板有助于加样时保持填
料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。)
2、将不同体积的 Acr-Bis(30%,29:1)、分离胶缓冲液和蒸馏水在小烧杯或试管中混合。
3、加入 APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于 mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm 或距梳齿约 0.5cm 即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层水层， 使凝胶表面保持平整。
5、静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
(二)灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表 3)
1、小心倾倒出覆盖在分离胶上的水层。/
2、将不同体积的 Acr-Bis(30%,29:1)、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入 APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
注意事项：
1、 过硫酸铵配制成 10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。
有效 避免失效的方法是分成小份，-20℃保存，用 2~3 次，剩余的弃用，亦可 4℃保
存几天。
2、 TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，
可 通过适当调节 TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固
4、Acr-Bis(30%,29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6、该产品仅适用于科研实验，不可做他用。
附表
附表 1 不同浓度的 SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE 分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
6%胶 |
50-150kD |
8%胶 |
30-90kD |
10%胶 |
20-80kD |
12%胶 |
12-60kD |
15%胶 |
10-40kD |
附表 2.配制 SDS-PAGE 分离胶
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
6%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
2.7 |
5.4 |
8.1 |
10.8 |
16.2 |
27 |
30% Acr-Bis (29:1) |
1.0 |
2.0 |
3.0 |
4.0 |
5.0 |
6.0 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
3.75 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.004 |
0.008 |
0.012 |
0.016 |
0.024 |
0.04 |
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
8%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
2.4 |
4.7 |
7.1 |
9.5 |
14.2 |
23.7 |
30% Acr-Bis (29:1) |
1.3 |
2.7 |
4.0 |
5.3 |
8.0 |
13.3 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
3.75 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.003 |
0.006 |
0.009 |
0.012 |
0.018 |
0.03 |
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
10%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
2.0 |
4.1 |
6.1 |
8.1 |
12.2 |
20.3 |
30% Acr-Bis (29:1) |
1.7 |
3.3 |
5.0 |
6.7 |
10.0 |
16.7 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
3.75 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.012 |
0.02 |
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
12%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
1.7 |
3.4 |
5.1 |
6.8 |
10.2 |
17 |
30% Acr-Bis (29:1) |
2.0 |
4.0 |
6.0 |
8.0 |
12.0 |
20.0 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
3.75 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.012 |
0.12 |
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
|||||
15%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
30 |
50 |
蒸馏水 |
1.2 |
2.4 |
3.6 |
4.8 |
7.2 |
12.0 |
30% Acr-Bis (29:1) |
2.5 |
5.0 |
10.0 |
10.0 |
15.0 |
25 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
1.25 |
2.5 |
5.0 |
5.0 |
7.5 |
12.5 |
10% SDS |
0.05 |
0.1 |
0.2 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.2 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.012 |
0.02 |
附表 3.按照如下表格配制 SDS-PAGE 的浓缩胶（也称堆积胶/积层胶或上层胶）：
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积（ml） |
||||||
5%胶 |
1 |
2 |
3 |
4 |
6 |
8 |
10 |
蒸馏水 |
0.68 |
1.4 |
2.1 |
2.7 |
4.1 |
5.5 |
6.8 |
30% Acr-Bis (29:1) |
0.17 |
0.33 |
0.5 |
0.67 |
1.0 |
1.3 |
1.7 |
1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
0.13 |
0.25 |
0.38 |
0.5 |
0.75 |
1.0 |
1.25 |
10% SDS |
0.01 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.06 |
0.08 |
0.1 |
10%过硫酸铵 |
0.01 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.06 |
0.08 |
0.1 |
TEMED |
0.001 |
0.002 |
0.003 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
