Bradford法蛋白定量试剂盒

简介：

目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA 蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford 法蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit) 。Bradford 法与传统方法相比，更简单、更稳定、兼容性更好。Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达 1M， DTT 的浓度可高达 5mM。但受高浓度的去垢剂的影响， 故在用Bradford Protein Assay Kit 进行蛋白定量的时候，需确保SDS 低于 0.01%，Triton X-100 低于 0.05%，Tween 20, 60, 80 低于 0.015%。含高浓度去污剂的蛋白定量。

BIOISCO Bradford Protein Assay Kit 检测速度很快，少量样品一般只需 10min 即可完成检测。检测浓度下限达到 25μg/ml，最小检测蛋白量达到 0.5μg，待测样品体积为1～20μl。在 50~1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系。

组成：

主要成分： 试剂(A): 主要由G250、缓冲液等组成。 试剂(B): 主要由牛血清白蛋白 (BSA)、防腐剂等组成。

自备材料：

1、酶标仪或分光光度计

2、微量移液器

3、双蒸水

4、96孔板

操作步骤(仅供参考)：

1、完全溶解蛋白标准(BSA 5mg/ml)，按蛋白标准:稀释液=1:9 进行稀释，如取蛋白标准 10μl 稀释溶解于稀释液 90μl，使终浓度为 0.5mg/ml。注意，蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也宜用什么溶液稀释。也可以用 0.9%NaCl 或PBS 稀释蛋白标准(BSA 5mg/ml) 。

2、将标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到96孔板的蛋白标准孔，加蛋白标准稀释液补足到20μl。

3、加适当体积样品到 96 孔板的样品孔中，补加标准品稀释液到 20μl。

4、各孔加入 200μl G250 染色液，室温放置 3～5min。

5、用酶标仪测定A595，或 560~610nm 之间的其它波长的吸光度。

6、根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

注意事项：

1.G250 染色液使用前充分混匀。

2.G250 染色液回复至室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。

3.蛋白标准在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。

4.待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。

5.需可检测 560~610nm 之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为 595nm，并需 96孔板。

6.建议每次测定时都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

7.如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大BCA 工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

8.为了您的和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。