考马斯亮蓝G250染料试剂

简介：

Bradford法也称考马斯蓝染色法（coomassie blue staining）。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2 min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1 h内保持稳定。该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。考马斯亮蓝G250在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。其染色原理是通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的作用力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子(如磺酸基)，从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。

BIOISCO 考马斯亮蓝G250染料试剂主要由考马斯亮蓝G250、乙醇、磷酸组成，多用于溶液体系中蛋白的定量分析，其特点在于对蛋白样品中可能存在的大多数盐、溶剂、缓冲液、硫醇、金属螯合剂、还原性物质等均不排斥，反应灵敏。该产品仅适用于科研实验，不可做他用。

组成：

产品名称	PD004-100ml	PD004-500ml	Storage
考马斯亮蓝G250染料试剂	100ml	500ml	RT 避光
说明书	一份

保存条件：

室温避光保存，3个月有效。

操作步骤（仅供参考）：

1、稀释蛋白标准(一般为BSA 5 mg/ml)使其终浓度为0.5 mg/ml。注意：蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也应用什么溶液稀释，也可以用 0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准。

2、将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 ul加到96孔板的蛋白标准孔中，加蛋白标准稀释液补足至20 ul。

3、加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加标准品稀释液至20 ul。

4、各孔加入200 ul考马斯亮蓝G250染料试剂室温放置。

5、 酶标仪测定595 nm波长处的吸光值，560~610 nm之间的波长也可。

6、 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

注意事项：

1、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。

2、 需可检测560~610 nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595 nm。

3、 建议每次测定时都做标准曲线。

4、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，考虑根据比色皿的最小检测体积。

5、 为了您的和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。