RIPA裂解液(弱)

简介：

多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液(弱) (Weak RIPA Lysis Buffer)是采用一种温和的裂解方法获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可用于PAGE电泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。 Weak RIPA Lysis Buffer主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

组成：

储存条件：

-20℃，12个月有效。

操作步骤(仅供参考)：

一)贴壁培养细胞

1、取Weak RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀，使用前取适量裂解液加入PMSF，使终浓度为1mM。

2、去除贴壁细胞的培养液，低速离心，弃上清，留取沉淀。

3、按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Weak RIPA Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞内，细胞就会被裂解/如果是所提蛋白样品用于CHIP,应置于冰上或4℃裂解。

4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5、进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

二)悬浮培养细胞

1、取Weak RIPA Lysis Buffer置于室温溶解混匀后，使用前取适量裂解液加入PMSF，使其最终浓度为1mM。

2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Weak RIPA Lysis Buffer。

4、4℃离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5、进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

三)组织样本

1、 取Weak RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，使用前取适量裂解液加入PMSF，使其最终浓度为1mM。

2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。

3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。

4、按20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。

5、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5、进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

注意事项：

1.去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。

2.如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

3.在培养细胞的裂解中，如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/离心管，然后再裂解。少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接粗，相对比较容易裂解充分。

4.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。

5.溶解Weak RIPA Lysis Bufferr时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。

6.细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。

7.本产品仅供科研使用，严禁它用。