抗坏血酸氧化酶(AAO)试剂盒

产品简介：

AAO 是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和 AAO 与细胞壁代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素 b 还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。 AAO 可直接氧化 AsA，通过测定 AsA 的氧化量，可计算得 AAO 活力。

实验中所需仪器及设备：

低温离心机、紫外分光光度计、1ml 石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。

组成：

产品名称	KE003-48T	Storage
试剂一	60ml	4℃
试剂二	50ml	4℃
试剂三	粉剂×1瓶	4℃
临用前加入10ml蒸馏水充分溶解。
说明书	一份

操作步骤（仅供参考）：

一、粗酶液提取：

按照组织质量g：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

二、AAO测定操作：

1.分光光度计预热30min，调节波长到265nm。

2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min。

3.空白管：依次在1ml石英比色皿中加入100μl蒸馏水、850μl预热的试剂二和50μl试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。

测定管：依次在1ml石英比色皿中加入100μl上清液、850μl预热的试剂二和50μl试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收A3和A4，△A测定管=A3-A4。

三、AAO活性计算：

（1）按蛋白浓度计算AAO活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmolAsA为1U。AAO(U/mgprot)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T=0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr（2）按样本质量计算AAO活性单位定义：25℃中每毫克样本每分钟氧化1μmolAsA为1U。AAO(U/g)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(W×V样÷V样总)÷T=0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷Wε：AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1cm；V反总：反应体系总体（L），1000μl=1×10-3L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V样：加入反应体系中上清液体（ml），100μl=0.1ml；V样总：加入提取液体，1ml；W，样本质量，g；T：催化反应时间（min），2min。

注意事项：

1、本产品仅供科研使用，严禁它用。