抗坏血酸过氧化物酶(APX)试剂盒

产品简介：

APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。APX催化H2O2氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX的活性直接影响到AsA的含量，在胁迫和解胁迫条件下，APX与AsA具有一定的负相关性。APX催化H2O2氧化AsA，通过测定AsA的氧化速率，可计算得APX活力。试验中所需的仪器和试剂：低温离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

组成：

产品名称	KE002-48T	Storage
试剂A	90ml	4℃
试剂B	粉剂×1瓶	4℃
临用前加5ml双蒸水充分溶解。
试剂C	5ml	4℃
说明书	一份

操作步骤（仅供参考）：

一、粗酶液提取：

按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂A）进行冰浴匀浆。13000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。

二、测定操作表：

1.分光光度计预热30min以上，调节波长到290nm，用蒸馏水调零。

2.试剂A在25℃中预热30min以上。

3.测定管：依次在1ml石英比色皿中加入100μl上清液、700μl预热的试剂A、100μl试剂B和100μl试剂C，迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A2和A1，△A=A2-A1。

APX活力计算：

(1)按样本蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmolAsA为1U。APX(μmol/min/mgprot)=△A÷(ε×d）×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T=1.79×△A÷Cpr（2）按样本质量计算单位的定义：每g组织每分钟氧化1μmolAsA为1U。APX(U/g)=△A÷(ε×d）×V反总×106÷(W×V样÷V样总)÷T=1.79×△A÷Wε：AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1cm；V反总：反应体系总体积（L），1000μl=1×10-3L；106：1mol=1×106μmol；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），100μl=0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；W，样本质量，g；T：催化反应时间（min），2min。

注意事项：

1、配制好的试剂B4℃保存，并且3天内使用完。

2、本产品仅供科研使用，严禁它用。